【摘 要】
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油菜是全球市场上重要的的油料作物,脂肪酸的成分会影响油菜的品质及用途,而芥酸含量就是主要的影响因素之一。b HLH型转录因子MYC2在JA介导的植物生长发育、抗逆胁迫和信号转导等方面起着关键作用,已有研究表明外源JA会影响芥酸的含量,但MYC2是否参与芥酸合成的调控还不清楚。本文旨在对甘蓝型油菜BnMYC2转录因子进行功能分析,探究其在芥酸合成中的作用及机制,为今后油菜的品质改良育种提供一定的理论
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油菜是全球市场上重要的的油料作物,脂肪酸的成分会影响油菜的品质及用途,而芥酸含量就是主要的影响因素之一。b HLH型转录因子MYC2在JA介导的植物生长发育、抗逆胁迫和信号转导等方面起着关键作用,已有研究表明外源JA会影响芥酸的含量,但MYC2是否参与芥酸合成的调控还不清楚。本文旨在对甘蓝型油菜BnMYC2转录因子进行功能分析,探究其在芥酸合成中的作用及机制,为今后油菜的品质改良育种提供一定的理论依据。因此,本研究对甘蓝型油菜BnMYC2转录因子与芥酸生物合成关键基因BnFAE1的关系进行了探讨,主要研究结果如下:1.从甘蓝型油菜黄花恢复系R18中克隆BnMYC2基因,BnMYC2基因的c DNA不具有内含子结构,c DNA完整开放阅读框（ORF）为1833 bp,编码一个包含610个氨基酸的蛋白,蛋白序列在第400到500个氨基酸之间有一个HLH（Helix-Loop-Helix）保守结构域,是一种典型的b HLH型转录因子,亚细胞定位预测结果表明BnMYC2定位于细胞核中。将携带BnMYC2的亚细胞定位重组质粒转入GV3101,注射法转化烟草下表皮细胞,荧光显微镜观察到的绿色荧光结果表明BnMYC2定位于细胞核中。2.构建BnMYC2启动子的GUS表达载体,转化拟南芥,对T3代转基因拟南芥进行GUS活性分析,结果表明BnMYC2启动子能够驱动GUS报告基因的表达,GUS基因在拟南芥的根、茎、叶脉、叶柄、花、果荚和种子中均有活性,但是在花、果荚和种子中活性较强。3.构建BnMYC2过表达载体,转化拟南芥,对T3代转基因拟南芥进行AtFAE1基因表达量检测和芥酸含量测定,结果表明BnMYC2负调控AtFAE1基因表达并且抑制芥酸合成。4.从中油821中克隆得到BnFAE1启动子共1310 bp,序列中含有TATA-box和CAAT-box等基本的核心启动子元件,植物激素、生长发育和逆境等的重要元件以及与MYC2结合的G-box和G-box-like序列等,根据序列分析和结合位点预测将BnFAE1启动子分为3段。5.酵母单杂交和双荧光素酶实验证明BnMYC2转录因子能与BnFAE1基因启动子全长以及截短体P2结合。
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