PCBs污染土壤基因多样性分析及联苯对土壤微生物的影响

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浙江省台州市是全国主要的电子垃圾回收利用中心,萧山市是变压器的一个存储地。因不规范的拆解及PCBs的泄漏,已对周围土壤造成了严重污染。本文以这两个污染点的土壤及浙江大学华家池土壤为研究对象。利用Geochip分析土壤微生物功能基因的多样性。同时在PCBs污染土壤中加入共代谢底物联苯经28℃恒温培养25天。本论文运用传统的微生物生态学研究方法、PCR-DGGE及荧光定量PCR技术研究PCBs污染及联苯对土壤微生物群落结构和bphA基因的影响。主要研究结论如下:(1)萧山和台州土壤中PCBs含量范围分别为19.14~91.47mg/kg、0.27~5.02mg/kg。萧山XS-1土壤中多数功能基因的信号强度高于台州LQ-1和萧山XS-2土壤中对应基因的信号强度;土壤中各基因的来源微生物及优势菌群存在着差异。(2)土壤细菌数量大小关系为:台州土壤>华家池土壤>萧山土壤。与对照相比,台州土壤添加联苯后细菌数量显著提高,萧山土壤中的情况与此相反。(3) DGGE特异性条带显示PCBs污染土壤中以Proteobacteria门为主要成分。联苯诱导后,萧山土壤中新出现3个条带,属于Sphingomonas、Polaromonas和unclassified γ-Protrobacteria;台州土壤中新出现4个条带,属于Sphingomonas、 Pseudomonas、Acidobacteria。这些克隆中具有与有机污染物降解密切相关的微生物类群。(4)所有处理土壤中都存在bphA基因,并且各土壤中携带bphA基因的微生物种类极为相似。联苯诱导的台州土壤中出现了一种新的微生物,属于Rhodococcus属,在萧山土壤中消失了一种Pseudomonas属的细菌。(5)定量分析结果显示bph D.2.A和bph D.2.A/B基因在萧山土壤各处理间无显著差异;与其它基因相比,台州和萧山土壤中bph D.1.C基因的丰度都是最低的;最值得注意的是,联苯诱导的台州土壤中bph D.2.A/B基因的丰度高出其它处理中该基因丰度几个数量级。经克隆实验证明造成该基因丰度大幅度提高的细菌与DGGE图谱T1中新出现的菌一致。
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