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恶性腹水是晚期癌症的常见并发症，腹水生长迅速，大量的腹水可致腹胀、纳差、呼吸困难，严重影响患者的生活质量。5-Fu作为临床的常规化疗药广泛应用在消化道肿瘤及其晚期产生的癌性腹水中。然而长期化疗产生的极大毒副作用，主要是免疫抑制，严重影响机体的免疫系统发挥抗肿瘤作用。IL-12作为重要的抗肿瘤细胞因子，可通过多途径激活机体的免疫系统，在抗肿瘤免疫中发挥重要作用。本论文中，首先制备小鼠恶性腹水模型，然后应用5-Fu与编码IL-12的质粒（pCMV-mIL-12）联合治疗小鼠恶性腹水，探讨二者联合的疗效和抗肿瘤机制。方法：腹腔注射H22细胞后的第3天，随机将小鼠分为5组：生理盐水组（saline）对照组、 pCMVβ对照组、pCMV-mIL-12治疗组、5-Fu治疗组、5-F+pCMV-mIL-12联合治疗组。将1.7ml含2.5μg pCMV-mIL-12质粒的生理盐水通过水流动力学方式单次注射到小鼠体内；5-Fu采用腹腔注射20mg/kg，连续注射5天。观察小鼠体重变化及生存期；ELISA检测血清中mIL-12和IFN-γ的表达水平；治疗不同时间点处死部分小鼠，测量腹水体积；HE染色观察腹水内细胞形态；流式细胞术检测肿瘤细胞周期及脾脏淋巴细胞亚群。将健康小鼠随机分4组：空白对照组（control）、5-Fu组、pCMV-mIL-12组、5-Fu+pCMV-mIL-12组，末次注射5-Fu后的24h检测外周血白细胞数。结果:1.小鼠生存期及体重变化经过治疗后，生理盐水组和pCMVβ对照组小鼠情况迅速恶化，从处理后的第8天开始死亡，到第13天全部死亡。与对照组相比，单独5-Fu与pCMV-mIL-12组以及二者联合组生存期明显延长，生命延长率分别达到104.4%、77.2%、133.6%。从小鼠体重来看，生理盐水和pCMVβ对照组小鼠体重上升迅速、变化幅度大；pCMV-mIL-12组也持上升趋势，但比起对照组较平缓。5-Fu组与联合组小鼠体重一直保持平稳直至实验结束（治疗后的29天）。2.小鼠腹水生成量治疗后第8天，生理盐水和pCMVβ组小鼠腹水生成量极大，性状极其粘稠并伴血性，联合组小鼠腹水量少，其中60%(3/5)一直没有腹水生成。腹水涂片HE染色后发现，5-Fu组和联合组的腹水液中有大量巨细胞，细胞胀大、细胞核边界不清、染色质紊乱、细胞浆丰富，有的胞膜已经不完整，处于一种不稳定即将崩解的状态。3.血清中mIL-12和IFN-γ的浓度在治疗后的8h检测血清mIL-12的表达，结果显示仅联合组和pCMV-mIL-12检测到mIL-12的表达，后者表达均值高于前者。在第3天检测了mIFN-γ的表达，单独pCMV-mIL-12表达最高，联合组次之，5-Fu组有少量表达。4.肿瘤细胞周期分析三个治疗组的G1、S期细胞比例明显高于pCMVβ组；而三个治疗组G2期细胞比例却明显低于pCMVβ组。5.脾脏淋巴细胞亚群从CD8+T细胞表达来看，在第8天，对照组与三个治疗组的比例相似；而在第12天时，三个治疗组CD8+T细胞的比例显著升高，IL-12组升高最明显，是第8天的2.13倍。从CD4+T细胞表达来看，在第8天，单独经过5-Fu治疗的CD4+T比例低于对照组，而单独pCMV-mIL-12组CD4+T比例却明显增加，二者联合治疗组结果介于单独治疗组之间；第12天CD4+T的比例各组趋势与第8天相似。比较Treg发现，第8天时，三个治疗组的比例均较对照组下降，联合组下降最明显；第12天时，所有组的Treg比例均下降。6.小鼠外周血白细胞计数单独注射5-Fu组小鼠WBC数明显低于对照组，pCMV-mIL-12组WBC计数与正常相似，而将pCMV-mIL-12于5-Fu联合后，WBC数较单独5-Fu组明显升高。结论：1.联合应用5-Fu和编码IL-12的质粒可以有效抑制恶性腹水生成，改善小鼠生存状态，延长生存期。2.联合应用5-Fu和编码IL-12的质粒可以更好的激活机体免疫系统，IL-12可以激活机体的免疫系统如CD8+T淋巴细胞的激活，并抑制Treg生成。3.编码IL-12的质粒可以提高由于5-Fu引起的外周血白细胞数的减少。