维甲酸诱导腭裂小鼠出生后未分化腭间充质细胞定位研究

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:KenBlove
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先天性唇腭裂是最常见的先天性发育畸形,常因为腭板短小而使手术治疗难以完全修复缺损。唇腭部组织再生修复目前仅见于干细胞促进的骨组织再生,而对腭部其他组织包括骨、骨骼肌和肌腱、软骨以及神经等未见报道。目的:本研究利用外源性BrdU可以标记slow-cycling long term label- retaining cells(LRCs)的特性,同时利用间充质干细胞候选标志物Stro-1、P75和CD57染色,定位正常小鼠出生后腭部未分化间充质细胞,进而检测维甲酸诱导腭裂小鼠腭部未分化间充质细胞与正常表达部位和模式的差异。方法:选择SPF级ICR孕鼠于E10给予维甲酸管饲做为实验组,建立小鼠腭裂模型。利用具有分化潜能细胞的慢周期特性,在E12给孕鼠80mg/kg的BrdU腹腔注射,分别在P0对照组和实验组获得新生小鼠组织进行灌流固定,常规脱水、透明、浸蜡、包埋,连续4μm蜡片备用。利用免疫荧光染色法,检测腭间充质细胞BrdU以及Stro-1、P75及CD57表达水平和分布。结果:1. P75和CD57阳性表达在细胞膜上。在正常对照组中,强表达在未发生骨化的腭中缝处的未分化间充质细胞,P75在邻近上皮的间充质中也有表达。在腭上皮中CD57表达在棘细胞全层,而P75特异性地表达在邻近基底层的棘细胞中。在维甲酸诱导腭裂组中,主要表达在血管周围及骨化中心周围的未分化间充质中,CD57在腭突远中端有较强阳性表达,在上皮中均未见表达。2. BrdU阳性表达在细胞核中,主要分为致密型强表达和散在颗粒型弱表达两种类型。在正常对照组中,致密型强表达集中在未发生骨化的腭中缝处的未分化间充质细胞中,前后腭无明显差异(P>0.05)。在维甲酸诱导腭裂组中,致密型强表达分布于腭突正中嵴处以及血管周围的间充质细胞中,前部腭突多于后部。维甲酸诱导腭裂组BrdU阳性表达显著多于正常对照组(P<0.01)。Stro-1与BrdU致密型强表达在血管周围有部分重叠,但阳性表达细胞数量较少。结论:正常小鼠在出生后腭部未分化间充质细胞数量较少,并主要局限于腭中缝处;而在出生后维甲酸诱导腭裂小鼠中,数量较多且较广泛存在于血管周围的腭突未分化间充质细胞为其组织工程学修复提供了可能。
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