青风藤提取制备工艺与宽筋藤质量控制方法研究

来源 :北京中医药大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:kpqkxx03592
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本论文共分为三部分。第一部分:文献研究防己科青牛胆属共有植物30余种,分布于东半球热带地区,我国有11种,主产于西南部、中部和南部。对青牛胆属植物的化学成分包括萜类、生物碱类、木脂素类等成分以及药理活性进行了综述,共引用文献62篇。第二部分:青风藤提取制备工艺和含量测定方法研究对青风藤生物碱部位的提取工艺进行了研究。采用L9(34)正交试验,以总生物碱及指标性成分青藤碱提取量为考察指标,对乙醇浓度、提取次数、提取时间和溶剂用量进行考察,建立了青风藤生物碱部位的最佳提取工艺为:青风藤药材70%乙醇提取2次,每次1.5小时,溶剂用量10倍量。采用离子交换树脂法富集了青风藤生物碱部位,以树脂对总生物碱及指标性成分青藤碱的吸附量、吸附-解析率及洗脱物中的含量为考察指标,建立青风藤生物碱部位树脂纯化工艺为:青风藤药材70%乙醇提取液,减压回收溶剂,浓缩液挥至无醇味,残留物加药材10倍量0.1%HCl超声分散(30min,100kHz),离心(30min,3000rpm),上清液备用,残渣再加药材10倍量0.1%HCl同法处理,合并二次上清液,即得浓度0.05g生药/mL的上样液,如至已处理好的D001-CC树脂柱(树脂柱径高比1:8),吸附流速3BV·h-,待树脂达到饱和吸附(树脂比吸附量为:1.61g青风藤生药/mL树脂、95.31mg总生物碱/mL树脂、35.42mg青藤碱/mL树脂)后,以50%乙醇7BV洗脱除杂,再用1%氨性乙醇洗脱(其中乙醇浓度为70%)9BV,洗脱流速6BV·h-1,收集氨性乙醇洗脱液,减压回收溶剂,残留物减压干燥,得青风藤生物碱部位。对青风藤生物碱部位提取纯化工艺进行验证,三批青风藤生物碱部位得得率为6.68-6.71%,总生物碱含量为62.12-62.83%,转移率70.11-71.18%;青藤碱含量为23.21-23.96%,转移率70.48-73.04%。建立了酸性染料比色法测定青风藤总生物碱提取物中总生物碱含量的方法。以青藤碱为对照品对总生物碱进行定量分析,青藤碱回归方程为Y=0.0841X+0.028(r=0.9996),在1.69-10.16μg/mL范围内与吸光度呈良好线性关系;青藤碱平均加样回收率(n=6)为101.12%,RSD为1.89%。表明该方法操作简便,测定结果准确、稳定,重复性好,可作为青风藤总生物碱提取物、青风藤生物碱部位及青风藤药材定量分析的有效方法。建立了测定青风藤总生物碱提取物中指标性成分青藤碱的HPLC含量测定方法。青藤碱回归方程为Y=1.7513×107X-67660(r=0.9996),线性范围为0.02064-0.1032mg/mL青风藤总生物碱提取物平均加样回收率(n=6)为98.13%;青风藤药材平均加样回收率(n=6)为99.33%,表明该方法操作简便,测定结果准确、稳定,重复性好,是控制青风藤总生物碱提取物、青风藤生物碱部位及青风藤药材质量的一种有效方法。第三部分宽筋藤总生物碱提取工艺和质量控制方法研究对宽筋藤总生物碱的提取工艺进行了研究。对提取溶剂进行了单因素考察,优选出盐酸-乙醇混合溶液提取效果较好。采用L9(34)正交试验,以总生物碱提取量为考察指标,对乙醇浓度、提取次数、提取时间和溶剂倍量进行考察,优选了宽筋藤总生物碱的最佳提取工艺为:宽筋藤药材盐酸-70%乙醇(1:100)提取3次,每次1小时,溶剂用量8倍量。建立了宽筋藤药材总生物碱含量测定方法。对提取方法进行考察,优选出最佳提取方法,即药材粉碎80目,加40倍量盐酸-甲醇(1:100)混合溶液,回流提取60min。以盐酸药根碱为对照品,采用紫外分光光度法测定宽筋藤总生物碱的含量,盐酸药根碱回归方程为Y=14.747X-0.0107(r=0.9995),在0.011~0.065mg/mL范围内与吸光度呈良好线性关系;宽筋藤药材平均加样回收率(n=6)为100.38%,RSD=1.95%。表明该方法操作简便,测定结果准确、稳定,重复性好,可作为宽筋藤总生物碱定量分析的有效方法。并采用该方法测定不同购买地宽筋藤总生物碱的含量,结果表明不同购买地宽筋藤药材中总生物碱的含量有较大差异。建立了宽筋藤药材的UPLC特征图谱。设定参照峰,应用中药色谱特征图谱相似度评价系统(2004A版)得出宽筋藤药材UPLC对照特征图谱。通过对全国16批不同购买地的宽筋藤药材的研究,确定35个色谱峰为宽筋藤药材的共有峰,经与对照图谱相比较,16批样品相似度在0.75~0.90之间,同时根据图谱中共有峰峰面积进行聚类分析,结果表明:我国宽筋藤饮片质量差异在全国分布无明显地域特征,但在云南、广东、广西三省份饮片质量较好,可能因这三省为主产地。建立了宽筋藤药材中盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的含量测定方法。采用HPLC法测定宽筋藤中盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的含量,对提取方法进行考察,优选出最佳提取方法,并采用该方法测定不同购买地宽筋藤药材中盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的含量,结果确定宽筋藤药材提取方法为,药材粉碎80目,加40倍量盐酸-甲醇(1:100)混合溶液,回流提取60min。不同购买地的宽筋藤药材盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的含量分别在0.00015%-0.00094%、0.000086%~0.00048%、0.000040%~0.00028%,表明我国宽筋藤饮片中盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的含量在全国分布无明显地域特征。
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