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黑曲霉脂肪酶(Aspergillus niger lipase,ANL)和猪胰脂肪酶(Porcine pancreas lipase,PPL)都具有Sn-1,3位专一性,在油脂加工等领域应用前景广阔。本课题以实验室前期应用中优化的黑曲霉脂肪酶ANL1、ANL2和猪胰脂肪酶PPL为基础制备固定化酶,探索最佳固定化载体和方法,进一步优化固定化条件,比较固定化酶和游离酶的酶学性质,并应用于催化鱼油酯交换富集EPA和DHA,结果如下:1.通过化学共沉淀法制备MNPs,接着用storber法在MNPs表面包覆SiO2得到S-MNPs,然后用APTES修饰二氧化硅表面,得到氨基化A-MNPs,采用XRD、FT-IR、TEM和TG进行表征分析,证明磁性纳米颗粒制备成功。以A-MNPs、大孔树脂和壳聚糖为载体,采用吸附法、交联法和共价结合法对ANL1、ANL2和PPL进行固定化。以酶活回收率为指标,确定以A-MNPs为载体,-CHO共价结合法固定化效果最佳,酶活回收率分别为46.42%,45.67%、47.63%。2.以A-MNPs为载体-CHO共价结合法制备固定化酶,设计五因素四水平正交实验优化,结果如下:固定化ANL1:戊二醛浓度3%、加酶量4mL、固定化pH 8.0、固定化温度30℃、固定化时间2h,酶活回收率为49.58%;固定化ANL2:戊二醛浓度为3%、加酶量2.5mL、固定化pH 9.0、固定化温度25℃、固定化时间1.5h,酶活回收率为50.13%;固定化PPL:戊二醛浓度为4%、加酶量2.5mL、固定化pH 7.0、固定化温度40℃、固定化时间3h,酶活回收率为51.30%。3.研究固定化ANL1、ANL2和PPL的酶学性质。固定化ANL1、ANL2和PPL的最适温度均为50℃,较游离酶提高10℃,最适pH分别为7.0、6.0、7.0,与游离酶一致。温度稳定性显著提高,70℃保存2h,固定化ANL1的残余酶活65.98%,而游离ANL1仅41.16%;60℃保存2h,游离ANL2和PPL的残余酶活分别为24.19%和36.22%,固定化ANL2和PPL达到54.89%和53.23%。pH稳定性也明显提高,pH值8.0保存2h,游离ANL1和ANL2的残余酶活分别为79.92%和80.31%,固定化ANL1和ANL2达到93.90%和92.09%,固定化PPL在游离酶良好稳定性的基础上得到提高。固定化ANL1、ANL2和PPL的活化能较游离酶均降低,且储存稳定性良好。4.以固定化ANL1、ANL2和PPL为催化剂,催化鱼油酯交换制备高EPA和DHA甘油酯鱼油产品。结果表明,固定化ANL1催化得到的甘油酯型鱼油EPA和DHA总含量为48.68%;固定化ANL2催化得到的EPA和DHA总含量为44.08%;固定化PPL催化得到EPA和DHA总含量为47.20%。重复使用6次后,固定化ANL 1、ANL2和PPL酶活力保留在50%左右,固定化酶的重复使用性能良好。