【摘 要】
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目的通过构建不同照射剂量和照射方式的小鼠模型,利用制备的BPIFA2多克隆抗体,探究血清中的BPIFA2分子在辐射方面的敏感性,是否可以作为核事故早期预判致死性放射损伤的潜在生物标志物分子。方法应用分子克隆法构建p GEX-4T-AB1-bpifa2重组质粒,将该重组质粒转化入Rosetta（DE3）感受态细胞后诱导重组蛋白表达,亲和层析柱纯化的重组蛋白为抗原免疫日本雌性大耳兔,制备BPIFA2多
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目的通过构建不同照射剂量和照射方式的小鼠模型,利用制备的BPIFA2多克隆抗体,探究血清中的BPIFA2分子在辐射方面的敏感性,是否可以作为核事故早期预判致死性放射损伤的潜在生物标志物分子。方法应用分子克隆法构建p GEX-4T-AB1-bpifa2重组质粒,将该重组质粒转化入Rosetta（DE3）感受态细胞后诱导重组蛋白表达,亲和层析柱纯化的重组蛋白为抗原免疫日本雌性大耳兔,制备BPIFA2多克隆抗体,利用小鼠组织对抗体的特异性进行验证。通过构建不同照射剂量或照射方式的小鼠模型,检测小鼠生理指标的变化;利用Western blot实验检测照射后小鼠血清中BPIFA2分子相对表达量的动态变化。结果1.制备的BPIFA2多克隆抗体在Western blot实验中成功检测到腮腺组织中的BPIFA2蛋白,而胸腺、肝脏及肾脏组织中没有检测到BPIFA2蛋白。2.在小鼠受到0Gy（对照组）、0.5Gy、1Gy、2Gy、4Gy、6.5Gy（亚致死剂量）、10Gy（致死剂量）的全身照射后,在照后1h小鼠血清中BPIFA2水平显著升高,并持续至受照后12h,随后BPIFA2表达水平降低。3.致死剂量全身照射后小鼠血清在BPIFA2蛋白水平在照后3d呈现显著的再次升高,亚致死剂量全身照射组和对照组小鼠血清在BPIFA2蛋白水平在照后3d没有出现再次升高的情况,证明这种升高与小鼠生存率密切相关。4.致死剂量局部照射后小鼠血清BPIFA2水平迅速升高,且受照面积越大,升高越明显。结论1.成功制备了BPIFA2多克隆抗体。2.不同剂量照射后早期小鼠血清BPIFA2升高,提示其是一种敏感可靠的放射损伤早期指标,可以用于大规模核事故早期的放射损伤人员的识别。3.致死剂量照射后3d小鼠血清BPIFA2蛋白出现显著二次升高,提示其可作为准确识别致死性放射损伤人员的生物标志物。4.辐射后小鼠血清BPIFA2表达水平升高反应整体损伤水平,与小鼠受照部位无关。图 16 幅;表 14 个;参 87 篇。
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