宫颈癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤,居女性恶性肿瘤的第二位。每年全球有52.9万新发宫颈癌病例,约有20万人死于宫颈癌,90%以上来自发展中国家。在我国每年大约有7.5万宫颈癌新发病例。大量研究资料表明,子宫颈癌的发生与病毒感染有关,尤其是与人乳头瘤病毒(HPV)感染密切相关。HPV是乳头瘤病毒中最具多样性的一类,迄今已发现尽百种,约30种不同型HPV可以感染生殖系统上皮细胞。各型HPV引起疾病的危险性高低不同,分为低危型和高危型。高危型HPV编码具有生长、刺激和转化功能的癌蛋白,导致宫颈上皮内瘤样病变和宫颈癌的发生,是引发子宫颈癌的主要原因。HPV检测和分型对宫颈癌预防与诊治至关重要。目前常用的细胞学检测灵敏度低,分型困难。基于实时荧光定量的核酸分型技术是HPV高敏分型检测技术。HPV检测与分型可以区分持续感染与一过性感染,单一感染和多重感染等;预测患者宫颈癌风险度,针对不同型别的感染采取不同的处理方案。本研究拟开发出基于磁微粒提取平台的人乳头瘤病毒(HPV)的24种不同诱癌风险的基因型的分型方法。针对常见的24种不同诱癌风险的HPV基因型,通过设计特异性的引物探针,建立磁珠法核酸提取和多重实时荧光定量PCR平台,确定方法的检测灵敏度、特异性等检测性能参数。本研究建立了基于磁微粒核酸提取平台的HPV基因分型检测技术,可以检测HPV的24种基因型,灵敏度达100 copies/ml,检测范围为1.0×10~2~1.0×10~9 copies/ml,分型准确,批间批内差异率均不高于5%,与带状疱疹病毒、单纯疱疹病毒、人乳头瘤病毒低危型、白色念珠菌、大肠杆菌、解脲支原体、生殖支原体、人型支原体、沙眼衣原体、淋病奈瑟菌没有交叉反应,不受样本中尿素(6%)、无机盐(6%)、免疫球蛋白(1.6 g/dL)、白细胞含量(1×10~7个/ml)、抗生素(6 mg/ml)的干扰。本方法可以实现单次同时对HPV 24种基因型的快速、灵敏甄别,可用于宫颈癌的早期诊断。