基于阿维链霉菌与壮观链霉菌种间基因组重排选育优良新型菌株的探索

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基因组重排是一种基于原生质体融合,并对原生质进行递推式融合的新型育种技术,该技术有重组频率高,重组范围广等多方面的优势,故颇受育种界重视。本论文通过阿维链霉菌和壮观链霉菌种间基因组重排选育优良新型菌株。通过对阿维链霉菌和壮观链霉菌的原生质体融合条件的探索,选择RM14为再生培养基,并以UV灭活处理原生质体存活率为1%,两菌原生质体比例为10:1~1:1进行融合。阿维链霉菌和壮观链霉菌基因组重排后,根据形态特征分批初筛单菌落,对初筛菌进行活体法复筛及HPLC检测摇瓶发酵筛选avermectinB1a高产菌株,所获理想菌株作为下一轮基因组重排亲本。结果,根据形态特征分批初筛获得的单菌落数分别为第一轮211,第二轮216和第三轮194株,共计621株菌,经活体生测筛选集双亲特性的重组子和HPLC检测摇瓶发酵获得的重组子可分为三类:Ⅰ类具抑菌特性的重组子,包括G2-67、G3-29和G3-31菌株,且抑菌特性稳定;Ⅱ类具高杀虫活性的重组子,包括G2-123等7株菌,且高效杀虫活性稳定;Ⅲ类具高产avermectin B1a的重组子,包括G2-145和G3-4菌株,它们摇瓶发酵的avermectinB1a效价比原始菌株分别提高13.6和11.8倍,达到2320μg/mL和2010μg/mL,且高产遗传性稳定。
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