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第一部分IDH基因表达在成人核型正常急性髓细胞白血病中的预后分析目的：探讨IDH基因mRNA表达与CN-AML患者预后的关系。方法：采用实时荧光定量PCR技术检测我院232例初发核型正常的急性髓细胞白血病(CN-AML)患者的骨髓单个核细胞、11例正常对照骨髓CD34‘细胞和20例正常对照外周血单个核细胞中IDH1和IDH2基因mRNA表达水平；同时应用PCR后直接测序方法检测CN-AML患者和正常对照的IDH1、IDH2、NMP1、 FLT3-ITD、DNMT3A和CEBPA突变。比较IDH1和IDH2基因mRNA表达水平在CN-AML患者和正常对照之间的差异。分析IDH1和IDH2基因mRNA表达水平与CN-AML患者总体生存(OS)、无事件生存(EFS)和无复发生存(RFS)的关系；并分析IDH1和IDH2基因mRNA表达水平与其它临床指标和基因突变的关系。结果：1、与正常对照相比,CN-AML患者IDH1基因mRNA表达水平高于正常对照骨髓CD34+细胞和正常对照外周血单个核细胞,p值分别为0.01和<0.001；CN-AML患者IDH2基因mRNA表达水平高于正常对照外周血单个核细胞P<0.001。2、米用Kaplan-Meier分析,IDH1基因mRNA低表达组患者3年的OS和EFS分别为50%和31%,IDH1基因mRNA高表达组患者3年的OS和EFS分别为26%和16%,IDH1基因mRNA低表达组的预后明显优于高表达组,其OS和EFS的P值均<0.001。而IDH2基因mRNA表达与CN-AML患者预后没有关系,OS、EFS和RFS差异均无统计学意义,p值均>0.05。3、用Cox回归模型纠正年龄、白细胞数、基因突变等因素,IDH1基因mRNA低表达组的预后明显优于高表达组,其OS和EFS的P值均<0.001。IDH1基因mRNA高表达是CN-AML患者的预后因素,IDH1基因mRNA高表达者预后差。4、通过分析IDH1基因mRNA表达与临床指标和基因突变关系发现：IDH1基因mRNA高表达主要集中M5患者中,其高表达与DNMT3A突变有关系,在DNMT3A突变患者中高表达者占16%,低表达者占5%,两者差异具有统计学意义,P=0.007；IDH1基因mRNA高表达与CEBPA双突变有关系,在CEBPA双突变患者中高表达者占7%,低表达者占17%,两者差异具有统计学意义,P=0.019。结论：我们首次发现IDH1基因mRNA高表达是独立于临床指标和高频基因突变的预后不良的标志物,IDH1基因mRNA表达水平可作为临床预后危险分层。第二部分IDH1基因表达在成人急性髓细胞白血病中的机制研究目的：(1)探索IDH1基因在AML中的作用机制；(2)寻找调控IDH1基因mRNA表达的microRNA。方法：(1)采用siRNA干扰方法沉默THP-1和HL-60/ADR细胞的IDH1基因,MTT法、流式细胞术检测其对生长、周期和凋亡影响,western blot检测凋亡和信号通路蛋白变化。(2)根据IDH1基因mRNA表达量高低从CN-AML中挑选16个患者标本,IDHl基因mRNA高表达和低表达各8例,采用Agilent Microarray芯片(SBC Human miRNA Microarray Release16.0)进行microRNA表达谱芯片分析,寻找与IDH1基因mRNA表达相关的microRNA。荧光定量PCR检测CN-AML患者的microRNA变化,对芯片结果进行验证。结果：(1)沉默THP-1细胞IDH1基因后,小干扰组细胞生长明显低于阴性对照组(p=0.04)；小干扰组48小时凋亡率为37.22±8.27%,明显高于阴性对照组19.50±1.18%(p=0.021),并伴随Caspase-3和PARP剪切带增加,PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制,但是小干扰组细胞与阴性对照组细胞相比,周期变化差异无统计学意义(p=0.89)。(2)沉默THP-1细胞IDH1基因后给予临床常用化疗药物如：HHT. ACR和DNR,能增加这些药物对THP-1细胞的敏感性。(3)沉默HL-60ADR细胞IDH1基因48小时后,Caspase-3和PARP剪切带增加,PI3K/AKT信号通路抑制,能部分逆转HL-60/ADR对阿霉素的耐药。(4)芯片结果显示：IDH1基因mRNA高表达组的患者中miR-181家族(miR-181a、miR-181a-2、miR-181b、miR-181c*、miR-181c、miR-181a*和miR-181d)、iR-146a、miR-128、miR-625、miR-25和miR-335低表达,miR-4286、miR-660、miR-107和miR-324-5p高表达,而在IDH1基因mRNA低表达组的患者中上述microRNAs表达相反。(5)荧光定量PCR也证实了在IDH1基因mRNA高表达组的患者miR-181d和miR-181b低表达,miR-4286高表达；而在IDH1基因mRNA低表达组的患者中上述microRNA表达相反。结论：(1)下调IDH1基因表达能降低AML细胞株的增殖,导致细胞凋亡,增加化疗药物的敏感性和逆转耐药。(2)在CN-AML患者中miR-181家族(miR-181d和miR-181b)起到抑癌基因作用,可能抑制IDH1基因mRNA的表达,miR-4286起到癌基因作用,可能促进IDH1基因mRNA的表达。