中药阿胶质量评价方法研究

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阿胶(Colla Corii Asini)始载于《神农本草经》,与人参、鹿茸并称为“滋补三宝”。《中华人民共和国药典》(2010)规定阿胶为马科动物驴Equus asinus L.的干皮或鲜皮经煎煮、浓缩而制成的。然而目前针对阿胶及其保健品尚缺乏有效的质量评价方法,导致市场上假阿胶及劣质阿胶层出不穷,尤其是在目前驴皮资源短缺的情况下,以猪皮、马皮、骡皮、牛皮等熬制而成的胶,经过适当加工后,其外观、性状与阿胶无异,鉴别难度较大。因此,建立有效的质量评价方法,用于区分阿胶与其他动物皮胶类药材,尤其是区分驴近亲源性动物(马和骡)的掺杂,对于阿胶的质量控制具有重要的意义。论文一共包括8个章节,主要由四个部分构成。论文的第一部分(第1章)为文献综述部分,总结了胶类中药材的研究现状及质量评价方法;并总结了阿胶的研究现状包括阿胶的化学成分、药理作用以及质量控制方法,最后阐述了课题研究的意义及研究内容。第二部分(第2、3章)为阿胶中的小分子量化合物的含量测定。其中第2章,采用《中国药典》(2010版)所规定的方法对市售阿胶中(市场价30-380元价格不等)的氨基酸含量进行了测定,测定结果均能达到药典的要求的标准。说明该方法无法用于评价阿胶的质量。第3章,基于阿胶及核苷类化合物均可增强免疫力的药理作用的理论基础,建立RP-HPLC法对阿胶的核苷类化合物进行含量测定,测定结果提示不同厂家生产的阿胶核苷类化合物含量差异较大(核苷类总含量的RSD>40%)。导致此结果可能为不同厂家所用原料(动物皮)的不同或生产工艺存在差异,但此方法亦无法用于评价阿胶的质量。第三部分(第4、5、6章)以阿胶药理作用的主要物质基础——蛋白质为核心研究对象,进行了相关分离及对比分析,首先尝试毛细管电泳分析(第4章)和凝胶色谱分析(第5章),但未获得理想的效果。接着重点尝试了凝胶电泳分析(第6章),通过SDS-PAGE的实验结果得知阿胶蛋白及多肽的分子量较大且呈连续分布,因此进一步将其采用蛋白酶水解后进行双向电泳分离分析。用建立好的双向电泳实验方法对同种酶水解的5种动物皮胶(按照阿胶的生产工艺自制了猪、马、牛、驴、骡皮胶)进行分离及对比分析,但发现无明显差异。因此,以蛋白类成分为阿胶的质量评价指标存在较大的困难,本文未取得相应的理想质量评价方法。第四部分(第7章)采用DNA鉴定技术,基于线粒体DNA的细胞色素c氧化酶亚基I序列,设计并筛选得到的马特异性引物SEQ-1和SEQ-2,可用于马源性成分特异性检出的PCR法,该方法操作简便、灵敏度高;基于SEQ引物序列进行优化,得到的GQ-1和GQ-2可应用于阿胶原料动物皮的鉴别。总之,猪皮、牛皮,尤其是马皮和骡皮熬制的明胶与阿胶有很多相似之处,阿胶的质量控制,需通过多种方法来保证其质量的正宗、上乘,从原料的真实性来说,DNA鉴定技术是目前较为理想的方法。
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