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锌带蛋白(zincribbonprotein)是锌指类蛋白的一种，它的Cys4Zn2+结合位点由3个β2片层折叠而成，而不是a螺旋结构。锌带结构与锌指结构同为转录因子结合核酸的结构域，锌带蛋白作为转录相关因子在调节基因表达活性等方面具有重要作用。在对家蚕蛹cDNA文库测序中，发现一个新的编码家蚕锌带蛋白基因的EST序列，以此序列为信息探针检索家蚕EST数据库，通过同源筛选，获得一个新的家蚕锌带蛋白基因cDNA全序列并经RT-PCR检测和克隆、测序验证，结果表明与电子克隆序列完全一致。本文将其命名为BmZNRD1(ZincRibbonDomainContaining1)，GenBank登陆号为DQ432055。该基因全长为675bp，由363bp的开放阅读框序列(ORF)、10bp的5端非翻译区序列(5UTR)和302bp的3端非编码区序列(3UTR)组成，其编码的120个氨基酸序列与其他真核生物间具有较高的同源性(达60％左右)，预测分子量为13.54KD，等电点为6.8。BmZNRD1氨基酸序列是一种锌带蛋白，推测有两个功能结构域，分别是位于N-端的Cx2Cx14Cx2C和C-端的Cx2Cx24Cx2C，其中C端保守氨基酸序列Cx2Cx6Yx3QxRSADEx2TxFx2Cx2C在生物进化中保守性很高，从酵母、果蝇、线虫到两栖类、哺乳类都有发现该结构域的存在，与酵母RNA聚合酶A亚单位9转录相关蛋白有很高的相似性，推测其具有相同的功能。将BmZNRD1基因cDNA序列与家蚕基因组序列进行比对，结果表明该基因具有3个外显子，两个内含子，外显子/内含子边界符合经典的GT-AG规则。
将RT-PCR扩增所得BmZNRD1基因完整的ORF克隆到pGEM-T-easy载体上，构建了重组质粒，经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后，插入融合表达载体pGEX-4T-1的相应酶切位点，成功构建重组融合蛋白表达质粒，并转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)，经PCR、酶切鉴定以及测序分析证实重组正确。IPTG诱导后裂解菌作SDS-PAGE分析，在39kD处有一浓集特异性蛋白条带，与预期值相符。表达量可达菌体总蛋白的40％左右。融合蛋白以不溶性的包涵体的形式存在，超声波裂解菌体分离包涵体并离心、洗涤；对包涵体进行溶解和梯度透析复性；采用亲和层析纯化融合蛋白GST-BmZNRD1。以该融合蛋白为抗原免疫两只雄性新西兰兔制作了该重组蛋白的多克隆抗体，ELISA检测该抗体血清的效价可达到1∶51200以上。Western印迹实验呈阳性，进一步证实了重组蛋白的表达。初步鉴定了重组蛋白的免疫反应性，为进一步研究该蛋白的结构、功能奠定了基础。利用ProteinA凝胶柱和多克隆抗体制备亲合柱，从家蚕蛹总蛋白中特异性结合家蚕转录相关锌带蛋白BmZNRD1,SDS-PAGE分析结果表明蛋白质大小与预计大小相符，可见清晰条带。ELISA结果表明，家蚕转录相关锌带蛋白BmZNRD1在家蚕化蛹后的整个阶段都有不同程度的表达。于化蛹后48h表达量达到峰值；此后BmZNRD1蛋白的表达量逐步下降，化蛹64h后表达量基本趋于稳定，与刚化蛹时该蛋白的表达量持平。