【摘 要】
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本文比较了GenBank中已登录的多种植物液泡膜Na/H逆向转运蛋白的氨基酸序列和核甘酸序列,根据保守序列设计一对简并引物,通过RT-PCR从紫花苜蓿(Medicago sativa L.)中扩增出
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本文比较了GenBank中已登录的多种植物液泡膜Na<+>/H<+>逆向转运蛋白的氨基酸序列和核甘酸序列,根据保守序列设计一对简并引物,通过RT-PCR从紫花苜蓿(Medicago sativa L.)中扩增出一288bp cDNA片段,根据此片段序列设计3端特异引物,利用3RACE得到1536bp的3端cDNA片段.根据3端片段序列设计5端特异引物,利用5RACE得到1082bp的5端cDNA片段.通过序列拼接获得该基因的全长cDNA,序列分析其含有一个完整的开放阅读框,编码的蛋白质含有541个氨基酸.通过半定量RT-PCR方法分析了MsNHX1基因在转录水平上的表达情况.结果显示,MsNHX1基因在叶中表达量最高,而在根中表达最弱;在高盐胁迫下(200mM NaCl),MsNHX1基因表达明显上调,在胁迫6个小时后达到最大值,但低温和干旱胁迫没有这种作用.利用PBI121载体,将MsNHX1基因构建植物表达载体PBINHX,转入到农杆菌LBA4404中,通过叶片共培养法转化紫花苜蓿,期望得到MsNHX1基因超量表达的转基因植物.经抗生素筛选,得到转化的再生苗.提取再生植株的叶中DNA,进行PCR检测,结果均呈阳性,初步证实所得再生植株是转基因植株.
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