钩藤主要药效成分积累的适宜条件研究

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本研究以钩藤为试验材料,采用响应曲面法(RSM)优化钩藤生物碱的提取条件,结合高效液相色谱法(HPLC)筛选出钩藤中生物碱的测定条件。通过研究光照强度、海拔高度和土壤养分对钩藤中生物碱含量积累变化的影响,确定在贵州种植钩藤的适宜条件和种植地区;同时比较不同生长年限钩藤中主要生物碱的变化,确定不同生长年限钩藤的适宜采收期。主要结果如下:1、通过RSM模拟得到提取钩藤叶中钩藤碱和异钩藤碱的最优条件为干燥温度54.95℃、超声时间60 min、甲醇浓度73.35%。在此条件下,钩藤碱的最高提取率为133.342μg·g-1,异钩藤碱的最高提取率为429.746μg·g-1。为了方便实际操作,校正条件为干燥温度55℃、超声提取60 min、甲醇浓度73%。通过验证试验得到钩藤碱平均提取率为130.8μg·g-1,异钩藤碱平均提取率为425.6μg·g-1,与模型预测值较为接近,说明该模型可以较好的优化钩藤叶中钩藤碱与异钩藤碱的提取条件。在Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-0.1%氨水(74∶26,V/V)等度洗脱;流速:1.0 mL·min-1;柱温:30℃;检测波长:246 nm的条件下对钩藤样品进行测定,发现去氢钩藤碱、异钩藤碱、异去氢钩藤碱和钩藤碱各物质的加样回收率分别为98.71%、100.59%、98.90%和105.76%,RSD均在3%以下,说明该方法分离度和稳定性好,且操作简单,适合测定钩藤中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱的含量。2、钩藤中生物碱的含量受不同环境因素的影响:对于成熟钩藤来说,适当的遮光有助于植物中次生代谢产物的积累,遮光程度越强,钩藤各部位所积累的生物碱含量越高,但长时间的遮光会使生物碱的含量逐渐降低;遮光处理也会影响钩藤幼苗中生物碱的积累,并且更有助于叶片中生物碱的积累,但遮光太强时,会抑制钩藤中钩的形成;海拔越高,温度越低,钩藤种植在海拔8001100 m(丹寨和长顺)时,其中积累的生物碱含量比种植在海拔11001300 m(贵阳和平坝)的含量高,因此海拔1100 m以下的地区适合种植钩藤;丹寨和长顺的钩藤种植地为林地,土壤肥力较好,土壤中全氮、碱解氮和速效磷的含量较高,这些对植株中生物碱的积累具有一定促进作用,在选择钩藤种植地时,应选择土壤中全氮、碱解氮和速效磷的含量较高的地区。综上,海拔高度、光照强度、土壤养分对钩藤生物碱的积累起着重要作用。钩藤适合栽种于海拔1100 m以下、土壤肥沃、具有一定遮蔽作用(中度遮光)的林地,所以丹寨和长顺是一个不错的钩藤种植地选择。3、不同生长年限的钩藤其采收期不同,一年生钩藤各部位的适宜采收期在8月;二年生各部位的适宜采收期在12月;三年生各部位的适宜采收期在8、9和11月;四年生除叶片外,其余部位适宜采收期在8月,叶片从8月到1月都可以采收,基本符合药典规定的秋冬两季采收。随着钩藤树龄的增加,其生物碱的含量逐渐降低。
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