固定化酶就是将酶通过吸附、交联等方法固定在载体上面所制得的,固定化酶技术不但没有改变酶原有的催化特性,并且还可以方便回收及重复利用。本文对固定化脂肪酶在制备工艺上进行了优化并对其催化油脂转酯反应进行了研究。主要研究内容及结果如下:由于脂肪酶的酶活力在固定化过程中容易损失,所以通过预先加入的橄榄油来保护脂肪酶的活性中心,再进行交联固定。在异辛烷环境下,加入油预处理得到的固定化脂肪酶的水解酶活是没有进行预处理的1.9倍。利用壳聚糖-大孔树脂作为载体制得了固定化脂肪酶,通过单因素及正交实验分析得到最佳的制备条件,其中,在橄榄油加入量为5 mL,预处理时间20 min,预处理温度30℃,壳聚糖浓度1.5%,山梨醇浓度2%,戊二醛浓度0.7%,活化时间1 h,固定时间10 h,酶载比1:10,固定温度25℃的条件下,得到的固定化脂肪酶的水解酶活为536 U/g,酶活回收率为73%。虽然在固定化之后酶活有损失,但是由于固定化脂肪酶具有容易回收可以重复利用、稳定性高的优点,在使用10次后仍然保留了59.93%的酶活性,通过实验测得游离酶和固定化脂肪酶的最适反应pH均为7,在酸性环境下,固定化脂肪酶的稳定性高于游离酶。在固定化脂肪酶催化油酸酯化的反应中对反应条件进行单因素及正交实验优化,实验结果表明,在10 g油酸、加水量10%、正己烷加入量5 mL、1 g固定化脂肪酶、醇油摩尔比4:1、40℃反应16 h的条件下,固定化脂肪酶对油酸的酯化率为92.15%。在最优反应条件下,固定化脂肪酶在使用了9次以后酯化率仍然保持在50%以上,说明了制得的固定化脂肪酶具有良好的重复使用性,在工业生产中具有重要的意义。