血小板浓缩生长因子对牙髓细胞和内皮细胞的促血管化作用研究

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牙髓血管再生/牙髓血运重建是治疗牙髓坏死的年轻恒牙的新方法,可达到促使牙根继续发育的临床效果,较传统的根管治疗具有明显的优越性。血小板浓缩生长因子(concentrate growth factors,CGF)是最新一代的血小板浓缩物,富含大量生长因子,能促进组织愈合,而且制备容易,生物相容性高,在口腔领域口腔种植,牙周手术等已有较多应用,但其在牙髓血管再生中的作用却鲜有研究。  目的:以 CGF体外作用于人牙髓细胞(dental pulp cells, DPCs)和人脐静脉血内皮细胞( human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)。研究CGF对DPCs和HUVECs的成血管作用,为CGF在牙髓血管再生中的应用提供实验依据。  方法:通过改良组织酶消化法分离获得人牙髓细胞后传代培养。取健康志愿者静脉血制成CGF,获得浓缩生长因子提取液(concentrate growth factors extracts,CGFe)。经剂量选择分为2%CGFe、5%CGFe、10%CGFe和15%CGFe不同浓度组为实验组,对照组培养基为仅含10%FBS的DMEM培养基,分别体外培养牙髓细胞和内皮细胞。CCK-8实验检测各组细胞增殖活性; qRT-PCR检测牙髓细胞VEGF、PDGF、CXCR4的 mRNA表达; western blotting检测牙髓细胞 VEGF、CXCR4的蛋白表达量;transwell实验检测CGFe对内皮细胞迁移的影响;体外成血管实验检测内皮细胞形成血管状结构的能力。  结果:CCK-8结果显示 CGFe能够明显促进牙髓细胞和内皮细胞的增殖,10%以内的CGFe促进牙髓细胞和内皮细胞增殖效果呈浓度依赖性(P<0.05);15%CGFe对牙髓细胞增殖影响与10%CGFe无明显差异(P>0.05);CGFe培养内皮细胞36h时,10%CGFe组较15CGFe组促进内皮细胞增殖作用更强(P<0.05)。因此确定10%CGFe为最佳作用浓度,后续实验组仅采用2%CGFe、5%CGFe和10%CGFe三组。CGFe作用于DPCs24h后牙髓细胞VEGF,PDGF,CXCR4 mRNA表量和 VEGF,CXCR4蛋白表达量均较对照组明显升高,以10%CGFe基因表达上调最明显,且结果呈浓度依赖性(P<0.05)。CGFe能促进内皮细胞的迁移,并促进体外形成血管状结构,10%CGFe作用效果最明显,且结果呈浓度依赖性(P<0.05)。  结论:CGF能促进牙髓细胞体外增殖和成血管分化;CGF能促进内皮细胞的增殖,迁移和体外形成血管状结构。
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