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目的本文旨在观察癌性微环境下肝星状细胞(HSC)神经营养素低亲合力受体p75(p75NTR)、神经营养素高亲合力受体酪氨酸激酶A(TrkA)的表达状况及神经生长因子(NGF)对HSC两种受体表达及细胞生存状态的影响,为深入了解肝癌细胞与间质细胞的相互作用提供实验依据。方法1、MTT法检测不同时间、不同浓度肝癌细胞(HepG2)上清液作为条件培养基(取12h、24h、48h的条件培养基分别按1∶8、1∶4、1∶2的比例用无血清DMEM稀释)对HSC增殖的影响,取促增殖作用最强的一组条件培养基作为实验用条件培养基。2、流式细胞仪(FCM)检测单纯培养HSC、肝癌细胞条件培养基处理HSC、肝癌细胞条件培养基与不同浓度NGF(1、10、100μg/L)共同作用下HSC的细胞周期和凋亡率变化。3、免疫组织化学(IHC)半定量检测单纯培养HSC、肝癌细胞条件培养基处理HSC、肝癌细胞条件培养基与不同浓度NGF共同作用下HSC的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、p75NTR、TrkA的蛋白表达,用计算机图像分析系统半定量分析。4、透射电镜(TEM)观察单纯培养HSC、肝癌细胞条件培养基处理HSC、肝癌细胞条件培养基与NGF共同作用下HSC的超微结构改变。结果1、MTT结果显示:48h的肝癌细胞条件培养基在1∶2浓度时对HSC的促增殖作用最强。2、FCM结果显示:与单纯培养的HSC相比,肝癌细胞条件培养基作用的HSC增殖指数升高,凋亡无明显变化;肝癌细胞条件培养基与NGF共同作用于HSC后,随着NGF浓度的增加,细胞凋亡率增加,但对细胞增殖无明显影响。3、免疫组化结果显示:α-SMA、P75NTR、TrkA在各组的HSC中均有表达。与单纯培养组相比,肝癌细胞条件培养基组的HSC表达α-SMA、P75NTR、TrkA均有不同程度的增加,在肝癌细胞条件培养基中加入NGF后,HSC表达α-SMA、P75NTR有随NGF浓度增加而增加的趋势,而表达TrkA有随NGF浓度增加而减少的趋势。4、透射电镜结果显示:单纯培养的HSC细胞形态完整,极少见凋亡细胞。肝癌细胞条件培养基作用的HSC,可见细胞增殖活跃,易见核分裂象,凋亡不明显。在肝癌细胞条件培养基中加入NGF后,HSC凋亡数目随NGF浓度的增加而增多,并可见不同时期的凋亡细胞。结论单纯培养的HSC表达p75NTR和TrkA。HSC经肝癌细胞条件培养基作用后,其p75NTR、TrkA的表达均增强。但在条件培养基中加入NGF后,HSC的p75NTR表达增强、TrkA表达减弱,细胞凋亡增加。提示在癌性微环境中NGF能促进HSC的凋亡。这种作用可能与NGF增强HSC的p75NTR表达、抑制TrkA的表达有关。本结果为我们深入了解肝癌微环境中肿瘤细胞与间质细胞的相互作用机制提供了实验依据。