轮状病毒(Rotavirus, RV)是引起婴幼儿重症腹泻最重要的病原,也是导致发展中国家婴幼儿死亡的主要原因之一。轮状病毒的治疗目前尚无特效药,临床上主要采用补液、维持电解质平衡及对症治疗等方法,只能挽救生命,不能控制病毒的传播。因此开发轮状疫苗成为当今WHO疫苗发展计划中的首要任务。目前国内外批准上市的疫苗有三种:人减毒活疫苗(Rotarix)、人-牛五价重配苗(RotaTeq)和羊减毒活疫苗(LLR)[2-4]。我国羊三价减毒活疫苗正在进行Ⅰ期临床,人-牛六价重配苗也处于研发阶段[5]。由于主要是A组轮状病毒引起儿童重症腹泻,所以这些疫苗的生产用病毒株均为A组。随着疫苗的研制与上市,对于疫苗来说究竟是单价还是多价能起到最好的保护效果?单价的是哪型好?多价的需要多少价才可以最大效果保护好人类?哪种型别的毒株能最大范围的与其他毒株进行交叉免疫保护?研究发现动物与人类毒株之间有在自然界发生重组的可能性。由于目前说法不一,并且缺乏基础研究,对疫苗的评价也造成困难,所以我们开展这个课题,以期解决目前的瓶颈问题。本课题采用已上市的两种种轮状病毒疫苗—葛兰素史克公司的人减毒活疫苗(Rotarix)和兰州生物制品研究所的羊减毒活疫苗(LLR)及轮状病毒Wa株、DS-1株,SA11株及ST-3株作为实验病毒株,进行了轮状病毒免疫交叉反应的研究。本研究就三个方面进行探讨,第一部分为轮状病毒减毒交叉免疫反应的研究,以期找到LLR和Rotarix免疫后抗体能最大范围保护哪种轮状病毒的感染。这些为以后轮状病毒疫苗的研发与质控打下基础;第二部分为从噬菌体展示随机十二肽库中筛选轮状病毒特异性结合肽的实验,挑选出于用轮状病毒免疫后血清结合力强的克隆,将获得的噬菌体克隆进行DNA测序,根据噬菌体克隆基因中所插入的外源DNA序列推导出呈现的外源多肽氨基酸序列,应用DNAStar软件及其它生物信息网络软件如BLAST软件将多肽序列比较分析,进行蛋白结构数据库和文献数据库检索;第三部分为轮状病毒结构蛋白VP5、VP6、VP7、VP8的原核表达与纯化,以期获得轮状病毒融合蛋白,并对其免疫原性进行研究。