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为研究家蚕有色茧的形成机理,探讨蚕体内叶黄素、黄酮类化合物等色素的代谢规律,本文从生化角度入手,以茧色限性品种大造花和大造白为材料,对雌雄体血液、丝腺中的叶黄素、黄酮类化合物含量作了测定,比较了黄茧、绿茧、白茧丝胶、丝素含量的差异,运用SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)技术和双向电泳(Two-dimensional electrophoresis,2-DE)技术,分析了不同茧色蚕体血蛋白在生长发育进程中的差异变化。获得如下主要研究结果:
1.茧色限性品种大造花和大造白在正常的桑叶饲养条件下,在三龄期便可从脚色观察出雌雄血色的差异,表明色素物质已经进入到蚕体的血腔中,控制黄血的Y基因在稚蚕的早期便已启动,让来自桑叶的色素物质透过蚕体中肠上皮细胞运送到血液中。
2.叶黄素在蚕体血淋巴和丝腺中的含量,均以结黄茧的蚕高于白茧蚕,并随生长发育而呈时序性的累积增加。血淋巴中的叶黄素含量,五龄期最高时达到26.4μg/mL,比白茧蚕高出24μg/mL。丝腺中叶黄素的含量,五龄期含量最高时为228.4μg/g,比白茧蚕高出223.1μg/g。
3.黄酮类化合物含量,在丝腺中,绿茧蚕明显高于黄茧蚕,在大蚕期随生长发育而逐渐增多,到五龄第4天达最高值3.84 mg/g,比黄茧蚕高出3.3 mg/g,黄茧蚕丝腺中黄酮类化合物的含量在0.6 mg/g以下,五龄期无明显变化。
4.不同颜色的蚕茧,丝胶丝素含量有差异,黄茧的丝胶、丝素含量分别为24.3%、75.7%,绿茧的丝胶、丝素含量分别为23.3%、76.7%,白茧的丝胶、丝素含量分别为22.2%、77.8%。
5.大造白和大造花四、五龄蚕体血清的蛋白质含量随生长发育增多,五龄第6天前后到达最高值。不同茧色类型的蚕体血清蛋白含量最高值也存在差异,大造白黄茧蚕94.36μg/μL,白茧蚕54.82μg/μL。大造花黄茧蚕111.4μg/μL,绿茧蚕81.86μg/μL。
6.蚕血清蛋白经SDS-PAGE电泳分析,大造花黄茧蚕、绿茧四龄期蚕血分别分离出21个、20个分子量不同的蛋白组分,其中有19个在龄期内均存在。五龄黄、绿茧蚕血分别分离出17个、19个不同分子量的蛋白组分,其中有15个组分在在五龄期均存在。
7.大造白黄、白茧五龄蚕血清总蛋白经双向电泳分离和ImageMaster2DPlatinum 5.0软件分析,共检测到507个蛋白点,其中黄茧蚕蛋白点287个,白茧蚕蛋白点220个,匹配蛋白点有210对,匹配率达到80.9%。黄、白茧特异点分别为82个和15个,主要分布在30kD~40 kD和70 kD~90kD区域。黄茧蚕血清蛋白双向电泳图谱中含量大于白茧蚕3~4倍的蛋白斑点有26个,白茧蚕血清蛋白双向电泳图谱中含量大于黄茧蚕3~4倍的蛋白斑点有11个,黄茧蚕有较多高丰度蛋白的表达。
8.黄茧蚕五龄第5天的血清特异蛋白点2540(蛋白编号)经串联质谱分析鉴定,与类葛佬素蛋白4(gloverin~like protein 4[Bombyx mori])有55.56%的同源性。