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目的:莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)是主要从十字花科蔬菜中提取的一种具强抗癌作用的植物化学活性物质,本实验通过研究SFN在体外对人胃腺癌SGC7901细胞的增殖及凋亡的影响,探讨其分子作用机制,旨在为胃癌的多模式治疗中拓展新的植物化学药物治疗提供实验资料。方法:1.体外培养人胃腺癌SGC7901细胞,MTT比色法检测SFN对SGC7901细胞增殖的影响。2.倒置相差显微镜及透射电镜观察SGC7901细胞形态学变化。3.利用流式细胞术,FITC- Annexin-V/PI双标法检测早期凋亡率、罗丹明-123染色法检测细胞线粒体跨膜电位以及DCFH-DA法检测细胞内活性氧水平,免疫细胞化学法检测细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Bcl-X/L及Fas蛋白的表达。4.流式细胞术PI染色法检测细胞周期,半定量RT-PCR法检测细胞P21基因的mRNA表达。结果:1. 6.25～200μM浓度范围的SFN对SGC7901细胞的增殖具有明显抑制作用,并呈现剂量和时间依赖效应。SFN作用于SGC7901细胞在24、48、72h的IC50值分别为61.13μM、43.74μM及33.21μM。2.透射电镜观察到在SFN作用后,SGC7901细胞呈现胞质浓缩,染色质浓缩边集,核膜破裂,而胞膜完整,细胞器保留等典型的早期凋亡形态改变。3.流式细胞术检测结果显示:(1)SFN能以剂量依赖的方式诱导SGC7901细胞产生凋亡。SFN 6.25μM、12.5μM、25μM、50μM作用SGC7901细胞24h的早期凋亡率分别为5.13±0.34%、8.37±0.67%、12.02±0.56%、24.89±0.37%,高于对照组2.74±0.31%,各浓度组间比较均p<0.01。(2)SGC7901细胞在SFN作用24h后,6.25～50μM各浓度组细胞线粒体跨膜电位较对照组均明显降低,p<0.01,并显示一定程度的剂量依赖效应。(3)SGC7901细胞在6.25～50μM SFN作用24h后,细胞内活性氧水平有不同程度的升高。免疫细胞化学法结果显示,经25μM SFN作用24h后,SGC7901细胞Bax及Fas蛋白表达明显增高,Bcl-X/L蛋白的表达明显减少,Bcl-2/Bax明显降低,延长作用时间至48h,这种改变进一步加强。4. PI染色法显示,6.25～25μM低浓度SFN作用SGC7901细胞24h后,G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少。RT-PCR结果显示,6.25～50μM SFN作用24h后, P21 mRNA表达明显增加,呈剂量依赖性。结论:1. SFN对SGC7901细胞的增殖具有明显抑制作用,并呈剂量和时间依赖效应。2. SFN以剂量依赖的方式诱导SGC7901细胞凋亡;SFN可能通过抑制Bcl-X/L蛋白表达,诱导Bax蛋白表达、活化,诱导产生经线粒体途径的内源性凋亡,细胞内活性氧在其中起到了积极作用。Fas蛋白表达增加提示可能同时存在经外源性途径的凋亡。3.低浓度SFN诱导SGC7901细胞产生G0/G1期阻滞;SFN可诱导P21基因表达,可能是其产生细胞周期阻滞的途径。4. SFN可诱导SGC7901细胞产生细胞周期阻滞,抑制其增殖,并诱导其凋亡,有望成为一种极具前景的抗胃癌药物。