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目的:本研究检测胃癌组织中COUP-TFII的表达量,研究过表达/敲低COUP-TFII影响胃癌细胞生物学特征的表现,探讨其与胃癌患者预后的关系及意义。方法:1.通过荧光实时定量PCR、Western-blot、免疫组化技术检测34例胃癌组织与正常胃粘膜组织中COUP-TFII的mRNA和蛋白的表达情况。2.通过荧光实时定量PCR、Western-blot检测不同胃癌细胞株和正常胃黏膜上皮细胞中COUP-TFII的表达情况。3.构建含目的基因的质粒载体,将慢病毒感染COUP-TFII低表达细胞株培养得到稳转细胞株。细胞功能学试验,如MTT实验、Transwell细胞侵袭/迁移实验、裸鼠肿瘤转移实验等,依次检测过表达COUP-TFII对胃癌细胞生物学特性的影响。4.构建敲低COUP-TFII基因的细胞系模型作为对照,检测COUP-TFII敲低后对胃癌细胞生物学特性的影响。5.通过oncomine数据库和在线生存分析数据库(www.kmplot.com)分析COUP-TFII基因的表达水平与患者临床病理参数和总生存率的关系。结果:1.荧光实时定量PCR检测结果显示,所选34例胃癌组织中COUP-TFII mRNA的相对表达水平低于正常胃黏膜组织,差异具有统计学意义(P<0.05);通过Western-blot检测19例胃癌组织,结果显示胃癌组织中COUP-TFII蛋白的相对表达量低于正常胃黏膜组织,差异具有统计学意义(P<0.01);免疫组化检测结果显示胃癌组织(11/19)中COUP-TFII的阳性表达率低于正常胃黏膜组织,差异具有统计学意义(P<0.01)。2.荧光实时定量PCR、Western-blot检测胃癌细胞株(SGC-7901、BGC-823、MGC-803)和正常胃黏膜上皮细胞株(GES-1)中COUP-TFII的mRNA和蛋白的相对表达水平,结果显示3株胃癌细胞株的COUP-TFII相对表达水平低于正常胃黏膜上皮细胞株(P<0.05),其中MGC-803的COUP-TFII的相对表达水平明显低于正常胃黏膜上皮细胞株(P<0.001)。3.成功构建稳定表达COUP-TFII的胃癌细胞稳转株MGC-803/COUP-TFII,Transwell细胞侵袭实验提示MGC-803/NR2F2组与MGC-803组、MGC-803/CTRL组相比较,细胞的穿膜能力显著减弱(P<0.001),MTT实验结果显示MGC-803/COUP-TFII组与空白组、对照组相比较,细胞增殖速率明显下降(P<0.001)。裸鼠肿瘤转移实验结果显示:MGC-803/NR2F2组形成的肝转移灶数量明显少于MGC-803/CTRL组(P<0.001)。4.正常胃黏膜上皮细胞株敲低COUP-TFII后,其增殖能力(P<0.01)、迁移力(P<0.01)和侵袭力(P<0.001)均有不同程度的提高。5.80例来自Oncomine数据库中与COUP-TFII相关的胃癌病例,其分析结果显示患者年龄、性别、病理分级与COUP-TFII表达量无关(P>0.05),与临床分期有关(P<0.01)。生存曲线表明高表达COUP-TFII能够提高胃癌患者生存率(P<0.01)。结论:1.胃癌组织与正常胃黏膜上皮组织中COUP-TFII的表达水平不同,COUP-TFII在胃癌组织中低表达,提示COUP-TFII在胃癌形成过程中起了明显的作用,在胃癌的演变过程中具有抑癌基因的功能。2.检测3株胃癌细胞株和正常胃黏膜上皮细胞株中COUP-TFII的表达水平,结果示正常胃黏膜上皮细胞株的COUP-TFII表达水平最高,MGC-803最低,提示选取MGC-803建立过表达稳转细胞模型,选取GES-1建立目的基因敲低细胞模型,用于后续检测细胞模型的生物学实验。3.过表达的COUP-TFII胃癌细胞,其侵袭迁移、增殖能力及转移性明显降低,而敲低COUP-TFII的胃黏膜上皮细胞其增殖、转移能力升高,说明COUP-TFII影响胃癌的增殖、侵袭和转移。4.COUP-TFII表达水平高低与患者年龄、性别、病理分级无关,与临床分期有关并影响预后生存率。