1.目的基因结缔组织生长因子(CTGF)的筛选、克隆及构建表达CTGF的重组腺病毒;2.CTGF与BMP、Wnt信号传导系统相互作用关系的研究

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目的:筛选Wnt、BMP两信号传导系统共同的作用及调节基因,将该基因克隆至腺病毒质粒载体中并导入包装细胞,产生表达目的基因的重组腺病毒。方法:采用基因芯片的方法筛选出Wnt、BMP两信号传导系统共同的作用及调节基因,体外克隆出目的基因并将该基因采用定向克隆的方法克隆进入穿梭质粒pAdTrack-CMV中,采用同源重组方法将该质粒和腺病毒质粒Adeasy-1连接,最后采用脂质体介导的方法导入包装细胞HEK293中,产生表达目的基因的重组腺病毒。 结果:(1)通过基因芯片的方法筛选出了与Wnt、BMP两信号传导系统均有密切作用的目的基因CTGF;(2)克隆出目的基因CTGF,并通过基因测序筛选出正确的克隆,成功构建重组质粒pAdTrack-CTGF;(3)将CTGF基因克隆进入腺病毒质粒载体中形成重组腺病毒质粒Adeasy-CTGF,并将重组腺病毒质粒Adeasy-CTGF导入包装细胞HEK293中形成表达CTGF的高滴度重组腺病毒Ad5-CTGF。结论:筛选出与Wnt、BMP两信号传导系统均有密切关系的共同下游作用基因CTGF,克隆出正确的CTGF基因并重组含有目的基因CTGF的腺病毒,收获高滴度重组腺病毒Ad5-CTGF,为进一步的研究打下了良好的基础。
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