百合(Lilium spp.)离体快繁及多倍体育种研究

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百合(Lilium spp.)是单子叶植物亚纲百合科(Liliaceae)百合属(Lilium)所有种类的总称,是世界著名切花之一,广泛用于食品和医药工业。百合商品种球繁殖率低,且易受病毒侵染而退化严重,导致其产品质量呈现下降趋势,因而,应用快速繁殖技术在短时期内生产大量优质种苗成为必要途径。再者,由于倍性育种产生的多倍体植株具有植株健壮,鳞片肥厚,高产优质等特点,因此,百合的倍性育种研究具有十分重要的理论意义和经济价值。本文以新铁炮百合与黄天霸百合为实验材料,针对快速繁殖体系的建立和染色体加倍进行了初步探讨,主要结果如下:1.以新铁炮百合为实验材料,对百合离体再生体系培养条件进行了研究,结果表明最佳外植体消毒方式是洗衣粉清洗20min,自来水冲洗15min,0.1%升汞消毒20min,0.2%次氯酸钠消毒15min,无菌水冲洗3~5次为宜,可把污染率降低到33.3%,并获得66.7%的诱导率。初代诱导百合芽分化的适宜培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA,诱导率达100%1新铁炮百合最佳继代增殖的培养基为MS+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA,其增殖系数5.0,黄天霸百合适宜继代培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA,其增殖系数6.75。新铁炮百合与黄天霸百合最佳生根培养基为1/2MS+0.2-0.5 mg/L IBA,植株和根系生长良好,生根率高,移栽成活率高。2.在建立离体再生体系基础上,利用秋水仙素溶液为诱变剂,采用浸泡法和包埋法对两种百合进行多倍体诱导,结果表明:两种方法中以浸泡法处理效果较好,二甲基亚砜的混合液处理效果比单独用秋水仙素溶液处理效果好。浸泡法以0.05%的秋水仙素和2%DMSO处理36h的诱变效果最佳,变异率达到了86%。混培法以添加0.05%的秋水仙素和2%DMSO处理10d后效果最佳,变异率达到了54%。DMSO对新铁炮百合的诱导率有促进作用。诱变产生的植株经染色体鉴定,其染色体数目为2n=4x=48,属四倍体类型。四倍体百合在二倍体的适宜增殖培养基上增殖,在1/2MS+0.2~0.5mg/LIBA的生根培养基上,增殖与生根情况良好。3.对四倍体和二倍体百合植株进行了外部形态和气孔特性的比较观察,结果表明:在同一生长阶段和环境条件下,四倍体植株叶片形态充分体现了器官的巨大性。四倍体植株叶片厚度明显增大,分别是二倍体的216.7%和164.3%,它们叶长比二倍体小,分别为84.8%和81.3%,它们叶形指数变小,分别为二倍体的63.6%和46.7%。四倍体植株保卫细胞内叶绿体数目明显多于二倍体,分别为二倍体的140.1%和142.6%,保卫细胞增大,长度和宽度均大于二倍体,分别为二倍体的126.9%、143.3%和158.9%、142.5%。气孔增大,长度和宽度均大于二倍体,分别为二倍体的136.0%、124.0%和123.7%、158.5%。而密度下降为二倍体的56.36%和69.64%。经方差分析上述各项指标均达到了极显著水平。因此,叶片厚度、叶片宽度、叶形指数、气孔密度、保卫细胞的大小和保卫细胞内叶绿体数目等可作为鉴别二倍体和四倍体百合的重要指标。4.对四倍体和二倍体百合植株进行低温处理后,比较电解质外渗率和细胞膜损伤率。在相同的低温下,四倍体植株比二倍体植株的电解质外渗率和细胞膜损伤率低,说明耐寒性和抗旱性均四倍体较强,充分体现了多倍体抗逆性增强的优势。另外,试验测定结果还发现,叶绿素含量随倍性的增加而增加,这些为指导百合的栽培生产和选育品种提供重要数据。
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