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酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)是成纤维细胞生长因子超家族成员之一,具有广泛的生物学功能,能影响多种细胞如间充质细胞,内分泌细胞,神经细胞的生长和分化。研究发现aFGF基因的mRNA在多种癌组织中呈过度表达,表明aFGF与肿瘤的发生和转移具有相关性。本实验室已克隆了抗aFGF抗体的可变区基因,并通过Linker将其连接成单链抗体基因,以便制备针对aFGF靶向治疗的抗体药物,由于目前使用原核表达体系获得重组蛋白需要蛋白复性等下游加工过程,本研究运用经改造的烟草花叶病毒(TMV)做载体在烟草(Nicotiana benthamiana)中瞬时表达抗aFGF的单链抗体(scFv),旨在寻求一种成本低,产量高,且蛋白活性好的表达scFv的体系。p35S-30B是一种基于植物病毒TMV的表达载体。它通过农杆菌的Ti质粒上的T-DNA将植物病毒基因组带入伤口附近的植物细胞,随后病毒在植株中形成系统扩散。在研究中我们通过构建p35S-30B-scFv,冻融法转化感受态农杆菌EHA105,获得的EHA105-p35S-30B-scFv可进行侵染烟草。我们以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,建立了烟草花叶病毒瞬时表达体系。用紫外灯(UV Products,model B 100AP,365nm)对经EHA105-p35S-30B-GFP侵染的烟草表达连续25天观察,确定在该表达体系中侵染后8-10天植物外源蛋白积累量达最大。随后我们利用这一体系在烟草中表达scFv,用重构的表达载体侵染烟草,10天后采集烟草,分析scFv表达。用pH7.4磷酸盐缓冲液(PBS)提取植物总蛋白,对蛋白提取物进行ELISA及Western-blot检测,从几次的检测结果可见,烟草中scFv蛋白占植物可溶性蛋白的量的0.5%;并进一步证明在真核体系中表达的抗体具有与抗原较好的结合活性。本研究应用植物病毒表达载体首次在烟草中表达了具有生物学活性的抗aFGF-scFv蛋白,为植物生物反应器生产有活性scFv提供了实验依据。