Fibulin-3与高血压血管内皮功能障碍和血管紧张素Ⅱ的相关性研究

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目的:血管内皮功能障碍是高血压病的重要发病机制,本研究通过体内和体外实验探讨Fibulin-3与原发性高血压(Essential hypertension,EH)血管内皮损伤和血管紧张素Ⅱ(Angiotensin II,AngII)水平的相关性。方法:本研究纳入108例原发性高血压患者(EH组)和31例健康人(对照组)为研究对象,采用血管内皮功能检测仪测定血流介导的血管内皮舒张功能(flow-mediated dilation,FMD),采用酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定血清Fibulin-3水平和放射免疫法(radio immunoassay,RIA)测定血清血管紧张素II(AngII)水平。同时,通过慢病毒转染人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),构建Fibulin-3低表达稳定细胞模型和Fibulin-3过表达稳定细胞模型,通过添加AngII刺激HUVECs,应用划痕愈合实验、Transwell实验、Cell Counting Kit-8(CCK-8)实验、周期实验、凋亡实验和血管形成实验,以探讨Fibulin-3对血管内皮细胞功能的影响和AngII对血管内皮细胞功能的影响。通过添加AngII以及同时添加AngII和选择性NF-κB通路(the nuclear factor kappa B pathway)抑制剂(Bay 11-7082)处理HUVECs,蛋白免疫印迹法(Western bolt)检测Fibulin-3蛋白表达水平的变化,以阐明AngII对血管内皮细胞中Fibulin-3基因表达的影响及相关作用机制。结果:(1)血清Fibulin-3水平和FMD水平在EH组明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);AngII水平在EH组明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);高血压患者血清Fibulin-3与FMD水平行相关性分析,两者呈正相关(r=0.255,P=0.023),血清Fibulin-3与AngII水平呈负相关(r=-0.431,P=0.02);(2)Fibulin-3低表达抑制了HUVECs的迁移、增殖和血管生成功能,但促进了HUVECs凋亡的发生;相反,Fibulin-3过表达促进了HUVECs的迁移、增殖和血管生成功能,同时抑制HUVECs发生凋亡;(3)AngII增强了HUVECs的迁移能力和增殖能力,促进HUVECs凋亡,并抑制了HUVECs的血管生成功能;(4)AngII明显抑制HUVECs的Fibulin-3蛋白表达;选择性NF-κB通路抑制剂(Bay 11-7082)可消除AngII抑制HUVECs中Fibulin-3基因表达的影响。结论:高血压患者血清Fibulin-3水平和FMD呈正相关,而与AngII水平呈负相关,提示检测血清Fibulin-3水平可作为高血压患者血管内皮损伤的预测指标;Fibulin-3基因表达下调抑制血管内皮细胞迁移、增殖和新生血管形成,而Fibulin-3基因过表达促进血管内皮细胞迁移、增殖和新生血管形成,Fibulin-3可能是高血压血管内皮损伤的修复因子;AngII抑制血管内皮细胞功能,并通过NF-κB信号通路抑制内皮细胞Fibulin-3基因的表达,Fibulin-3基因对于维持血管内皮的生理功能具有重要作用。
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