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化学发光分析法具有很高的灵敏度,且具有仪器设备简单、操作方便、快捷、线性响应范围宽和易于实现自动化等显著优点,越来越受到科研工作者的广泛关注。本文研究了荧光素(Fluorescein,F)对Luminol-H2O2-HRP化学发光体系的增强作用,对其反应机理进行了研究,得到Luminol-H2O2-HRP-F化学发光共振能量转移体系(CRET)。基于该CRET体系,实现了对DNA的灵敏检测。将该体系进一步用于构建化学发光共振能量转移双螺旋分子信标适体探针,实现了对K562癌细胞和4T1癌细胞中ATP的快速检测,检测结果与HPLC法检测结果具有良好的一致性。本方法灵敏度高,线性范围宽,操作简便,可用于肿瘤标志物的快速、灵敏检测。本文主要开展了以下几个方面的工作:一、Luminol-H2O2-HRP-F化学发光共振能量转移增强化学发光体系的研究研究了荧光素(Fluorescein,F)对Luminol-H2O2-HRP化学发光反应体系的增强作用,对其反应机理进行了研究,讨论了Luminol-H2O2-HRP-F增强化学发光体系的动力学性质和荧光光谱性质,研究了荧光素浓度对Luminol-H2O2-HRP化学发光荧光光谱的影响。在此基础上,初步提出了Luminol-H2O2-HRP-F化学发光共振能量转移增强化学发光体系。二、利用Luminuol还原HAuCl4法制备LumAuNPs纳米粒子的研究本文利用Luminuol还原HAuCl4法制备了LumAuNPs纳米复合粒子。讨论了反应物的用量对LumAuNPs复合粒子颗粒大小的影响。TEM结果表明,该方法制得的纳米粒子分散性好,粒径均一,且具有良好的化学发光性质。综合LumAuNPs复合粒子的紫外可见、荧光及化学发光性质,确定了Luminol-H2O2-HRP-F化学发光共振能量转移体系中制备LumAuNPs复合粒子的最佳反应物的条件为:0.02%的HAuCl4溶液100 mL,0.01 mol/L Luminol溶液1.8 mL。三、基于化学发光共振能量转移体系构建的新型双螺旋分子信标探针用于DNA检测的研究基于Luminol-H2O2-HRP-F化学发光共振能量转移体系,构建了化学发光共振能量转移双螺旋分子信标探针(CRET-BMBP)用于DNA的检测。其中,CRET-BMBP检测DNA的线性范围为1.0×10-9 ~ 1.0×10-8 mol·L-1,线性回归方程为y = 11.57679 + 60.09556 x,线性相关系数R = 0.99935,并且我们引入了Au@Fe3O4复合粒子来降低信号背景值改进实验方法,此时,DNA的线性范围为1.0×10-10 ~ 1.0×10-9mol·L-1,线性回归方程为y = 9.69283 + 73.61775 x,线性相关系数R = 0.99975。在此基础上,进一步对该检测方法的选择性进行了研究。四、基于化学发光共振能量转移体系构建的新型分子信标适体探针用于癌细胞中ATP检测的研究基于Luminol-H2O2-HRP-F化学发光共振能量转移体系,构建了化学发光共振能量转移双螺旋分子信标适体探针(CRET-BMBP)用于三磷酸腺苷(ATP)的检测。其中,CRET-BMBP检测ATP线性范围为1.0×10-6 M～1.0×10-5 M,线性回归方程为I = 56.0273 C + 17.4505,检测限为1.1×10-7 M;在此基础上讨论了ATP与适体的反应温度以对ATP检测的影响。将该体系成功地用于K562癌细胞和4T1癌细胞中ATP的快速检测,K562癌细胞中ATP浓度为3.7 (±0.3) mM,4T1癌细胞中ATP浓度为2.4 (±0.3) mM,(n = 3)。检测结果与HPLC法检测结果具有良好的一致性,线性相关系数分别为R = 0.9997 (CRET-BMBP)。