壳聚糖甘油二酯乳脂微乳液的制备、特性及在Caco-2细胞中的转运吸收

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甘油二酯乳脂是由乳脂改性得到的,通过一定的工艺提高了其中1,3-甘油二酯的含量。有研究表明1,3-甘油二酯具备减肥降脂的功能,但是由于1,3-甘油二酯极易被氧化,氧化后活性降低。因此考虑将微乳化的技术运用于此,以期提高其生物利用度。而壳聚糖是自然界唯一带阳离子的天然活性多糖,来源丰富,天然无毒,与人体细胞有较好的亲和性。本研究选择壳聚糖为壁材,通过离子交联法制备壳聚糖甘油二酯乳脂微乳液,对其相关性质做以研究,并构建Caco-2细胞单层膜模型,探讨壳聚糖甘油二酯乳脂微乳液在其中转运吸收的特点,及其对相关基因表达的影响。1、壳聚糖甘油二酯乳脂微乳液的制备工艺优化采用微乳液的粒径和包埋率做为指标,对壳聚糖溶液质量浓度、三聚磷酸钠(TPP)溶液质量浓度、壳聚糖与甘油二酯乳脂的质量比、壳聚糖溶液与TPP溶液体积比几个工艺参数进行优化,在确定TPP溶液质量浓度为1.5mg/mL的条件下,通过响应面优化制备工艺参数,得到最佳条件为:壳聚糖溶液质量浓度为3.44 mg/mL,壳聚糖与甘油二酯乳脂的质量比为1:2.79,壳聚糖溶液与TPP溶液的体积比为2:1。2、壳聚糖甘油二酯乳脂微乳液的特性研究对壳聚糖甘油二酯乳脂微乳液的类型、表面性质、及温度、贮藏和抗氧化稳定性等进行研究。结果显示:微乳液为水包油型,带正电,粒子分布均匀,平均粒径在93.7nm左右,有明显的壳核结构,包被效果良好。微乳液在2070℃的温度范围内有相对较好的稳定性,最佳贮藏环境为4℃,且微乳液的包被处理很好地延缓了油脂的氧化。3、壳聚糖甘油二酯乳脂微乳液的转运及其对相关基因表达的影响建立Caco-2细胞的单层膜模型,选用跨膜电阻值及酚磺酞透过率为指标判定该模型建立的成功与否。选用Transwell六孔板,在15d左右跨膜电阻值达到最高值,而后略有下降,并逐渐稳定,在21d电阻值达1380??cm2左右。酚磺酞的透过率在15d左右也趋于稳定,达到12%左右。表明细胞膜完整致密,可以进行后续实验。采用CCK-8法确定在细胞实验中被试溶液的给药浓度。壳聚糖甘油二酯乳脂微乳液的IC50值为277.3mg/L(甘油二酯乳脂的质量浓度)/94.8mg/L(壳聚糖的质量浓度),甘油二酯乳脂的IC50值为833.3mg/L,空载壳聚糖溶液的IC50值为265.4mg/L。在Transwell试验中壳聚糖甘油二酯乳脂微乳液在转运过程中,存在主动转运机制,呈浓度依赖型。而对于1,3-甘油二酯乳脂的转运,在2h后转运即不再随着浓度增加而继续增加转运量。壳聚糖甘油二酯乳脂微乳液在小肠吸收转运过程中影响着相关脂类转运基因的表达,上调了MTP和FABP1基因的表达,但对ABCA1转运蛋白的表达影响甚微。
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