GABA能系统介导电针缓解哮喘小鼠气道炎症的机制研究

来源 :北京协和医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kuangzhiyong
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背景哮喘是一种呼吸系统的异质性疾病,主要特征为慢性气道炎症,常伴随气道高反应、呼吸可逆性气流受限等症状,若治疗不当易引发严重后果。临床和实验研究都表明,电针可以有效缓解哮喘,然而其潜在的治疗机制尚不完全清楚。已有研究表明,电针能显著提高小鼠体内抑制性神经递质γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的含量,同时还能提高 GABAA 型受体(γ-aminobutyric acid type A receptor,GABAAR)的表达水平。本课题组前期研究则发现,GABAAR激动剂可以通过调节toll样受体4/髓样分化因子88/核转录因子κB(toll-like receptor 4/myeloid differentiation factor 88/nuclear factor-kappa B,TLR4/MyD88/NF-κB)这一炎症通路减轻哮喘小鼠的气道炎症反应。因此,我们推测电针可以激活GABA能系统,从而抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,缓解哮喘气道炎症反应。方法选取体重为20~25 g的雌性BALB/c小鼠用于哮喘模型的建立。使用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)对小鼠进行哮喘致敏和激发,分别于第1、8天对小鼠采用50μg OVA溶液腹腔注射致敏,于第21、23、25、28天使用200 μg OVA溶液滴鼻激发。对采用电针治疗的小鼠,在第8~21天选择肺俞穴(BL13)和天突穴(CV22)施予电针刺激,隔天进行,每次约30 min。第29天对小鼠进行肺功能检测,取肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavage fluid,BALF)用于炎症细胞分类计数,炎性细胞因子(IL-4,IL-5,IL-13)检测,取左肺用于染色,右肺用于蛋白检测。第一部分实验采用Western blot和免疫染色技术检测各组小鼠肺组织中GABA含量,以及GABAAR和TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的表达。将小鼠随机分为4组,每组5只:正常对照组(Control)、正常小鼠+电针治疗组(EA)、哮喘组(OVA)和哮喘小鼠+电针治疗组(OVA+EA)。第二部分实验使用GABAAR拮抗剂进一步明确GABAAR在电针治疗哮喘中的作用以及GABAAR对TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响。将小鼠随机分为4组,每组5只:正常对照组(Control)、哮喘组(OVA)、哮喘小鼠+电针治疗组(OVA+EA)和哮喘小鼠+电针治疗+GABAAR拮抗剂组(OVA+EA+antagonist)。检测各组小鼠肺功能,病理组织染色观察小鼠炎性细胞浸润以及杯状细胞粘液分泌情况,采用瑞士-吉姆萨染色法对BALF中的炎症细胞分类计数,使用ELISA检测BALF中的炎症因子水平,Western blot和免疫组化技术检测TLR4/MyD88/NF-κB信号通路表达的变化。结果第一部分实验中,与Control组相比,OVA组内小鼠肺组织内GABA含量及GABAAR表达水平升高(P<0.01),EA组中小鼠肺组织内的GABA含量及GABAAR水平无明显变化(P>0.05)。与OVA组相比,OVA+EA组中小鼠肺组织内的GABA含量及GABAAR表达显著增多(P<0.05)。与Control组相比,OVA组中TLR4,MyD88和NF-κB的蛋白表达均显著增高(P<0.01)。与OVA组相比,OVA+EA组中TLR4,MyD88和NF-κB的蛋白表达均显著减少(P<0.05)。第二部分实验中,与OVA+EA组相比,在OVA+EA+antagonist组中,小鼠气道阻力升高(P<0.05),肺组织中炎性细胞浸润增多(P<0.01),杯状细胞粘液分泌增加(P<0.01),BALF中炎症细胞计数增多(P<0.05),炎症因子水平升高(P<0.05)。与 OVA+EA 组相比,OVA+EA+antagonist 组中小鼠的 TLR4,MyD88 和 NF-κB 蛋白表达明显增加(P<0.01)。结论电针可以激活哮喘小鼠肺组织中的GABA能系统,提高GABA水平及GABAAR的表达,抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,从而减轻哮喘小鼠气道炎症反应。背景低血压是剖宫产手术中腰麻(spinal anesthesia,SA)引起的常见并发症,可能对产妇和胎儿的身体健康状况产生不良影响。有研究认为液体输注对于降低低血压的发生有一定疗效。然而,胶体预负荷是否可以优化剖宫产产妇的术中血流动力学指标,仍然存在争议。本研究旨在明确胶体预负荷对择期剖宫产术中SA引起的产妇低血压发生率的影响。方法从文献库的开始日期到2020年5月,在PubMed、EMBASE和Cochrane Library数据库上搜索关键词及同义词,纳入有关胶体预负荷对剖宫产产妇术中低血压影响的随机对照研究,并严格评估纳入研究的质量。主要结局指标是术中低血压和严重低血压的发生率。次要结局指标包括术中最低收缩压、术中最高心率、麻黄碱和去氧肾上腺素的术中用量、产妇恶心和/或呕吐的发生率,以及新生儿结局(脐动脉pH值和Apgar评分)。采用Review Manager 5.3软件进行数据分析。结果该荟萃分析共纳入9项随机对照试验。本研究发现,与对照组相比,胶体预负荷组术中低血压、严重低血压的发生率无统计学差异;新生儿结局方面,除脐动脉pH值以外,其它指标没有显著差异。结论这项荟萃分析表明,胶体预负荷并不能显著降低择期剖宫产术中与SA相关的低血压的发生率。
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