【摘 要】
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目的：构建stathmin-siRNA重组质粒表达载体,建立stathmin表达沉默鼻咽癌5-8F细胞株,探讨stathmin沉默对鼻咽癌5-8F细胞的增殖、周期和成瘤性的影响,为鼻咽癌的基因治疗提供实
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目的：构建stathmin-siRNA重组质粒表达载体,建立stathmin表达沉默鼻咽癌5-8F细胞株,探讨stathmin沉默对鼻咽癌5-8F细胞的增殖、周期和成瘤性的影响,为鼻咽癌的基因治疗提供实验依据。方法：(1)合成stathmin特异性siRNA片段,片段插入pGenesil-1.1质粒表达载体构建重组质粒表达载体。(2)重组质粒表达载体转染,RT-PCR和Western blotting鉴定,建立stathmin稳定抑制表达5-8F细胞株。(3)MTT实验分析细胞的增殖,流式细胞仪分析细胞的周期。(4)裸鼠移植瘤实验分析肿瘤细胞的成瘤性。结果：(1)获得了stathmin siRNA pGenesil-1.1重组质粒表达载体和stathmin沉默的鼻咽癌5-8F细胞株。(2)Stathmin沉默5-8F细胞株孵育48、72和96h,细胞增殖抑制率分别为(33.67±2.52)%,(28.33±1.15)%,(31.67±1.53)%,与阴性对照组分别为(8.13±0.60)%,(3.20±0.53)%,(3.97±0.15)%和空白对照组(0)比较,差异有显著性(p<0.01)。(3)Stathmin沉默组G2期细胞为(15.8±0.55)%,与阴性对照组(11.3±0.79)%和空白对照组(10.9±0.92)%比较,差异有显著性(P<0.05)。(4)Stathmin沉默组,裸鼠移植瘤重量为(0.32±0.21)g,与阴性对照组(1.10±0.40)g和空白对照组(1.52±0.30)g比较,差异有显著性(P<0.05)结论：(1)成功构建stathmin-siRNA重组质粒表达载体。(2)建立了stathmin急定抑制表达的5-8F细胞株。(3)Stathmin沉默抑制5-8F细胞的恶性生物学表型。
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