红细胞血型是指红细胞膜上特异抗原的类型。红细胞血型研究不仅能保证安全输血、挽救生命，同时在法医鉴定，遗传性疾病、癌症、病毒及寄生虫疾病的研究中扮演着重要的角色，至20世纪末，国际输血协会(ISBT)已将红细胞抗原分为29个血型系统，600多种抗原决定簇，从而使血型学研究发展成为一门独立的学科。除ABO、Rh血型系统外，MN血型系统也是一类重要的红细胞血型，该系统抗原由位于第4号染色体上的GPA基因编码，主要有M、N两个抗原表位，两者的区别在于：当GPA分子的N末端1，5位分别为丝氨酸和甘氨酸时，表现为M型抗原，当其相应位置为亮氨酸和谷氨酸时，表现为N型抗原。除此之外，分子中其它氨基酸的序列均相同。MN血型系统抗原抗体不合导致的严重输血反应、新生儿溶血及自身免疫性贫血等病例也时有报道，因此，国外早已将MN血型作为常规的检测项目，但因缺乏相关检测抗体，该检测在国内各大医院和血站均未开展。本研究目的在于通过制备人红细胞血型糖蛋白A单克隆抗体，从而为MN血型的研究提供可靠的检测试剂。 本研究通过RT-PCR的方法成功地从K562细胞中扩增了GPA基因，克隆入T载体后，将GPA双酶切亚克隆入逆转录病毒载体pEGZ，用此重组逆转录病毒载体转染293T细胞，收集上清感染L929细胞，Zeocin筛选得到阳性克隆；通过RT-PCR及流式细胞(FCM)等方法对稳定转染GPA的L929细胞进行检测，以获得稳定表达GPA的L929细胞系。从而为血清中抗GPA特异性抗体的检测及GPA单克隆抗体的制备和研究奠定基础。 分别以红细胞、GPA转基因细胞作为免疫原，经B淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。通过ELISA，谱细胞筛选等方法成功获得1株分泌抗M的GPA特异性单克隆的杂交瘤细胞系。为临床血型检测提供了非常有用的试剂。