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背景:小胶质细胞活化和神经炎症在缺血性脑卒中的损伤和修复中起着关键作用。白藜芦醇具有抗炎和调节小胶质细胞活化的作用,然而机制仍未阐明。已有的研究显示激活的Shh信号具有抗炎作用。本课题组前期研究显示白藜芦醇能增强Shh信号的激活发挥神经保护或修复作用,而白藜芦醇是Sirt1激动剂。因此,白藜芦醇是否通过Sirt1激活Shh信号影响小胶质细胞活化及炎症反应?尚待阐明。因此,本研究采用离体和在体结合方式探讨白藜芦醇是否通过Sirt1激活Shh信号影响小胶质细胞的活化和炎症反应,为白藜芦醇早日用于临床或开发药物治疗靶点奠定实验基础。方法:采用体外N9小胶质细胞构建氧糖剥夺/再复氧模型(OGD/R)和体内C57BL/6小鼠构建大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)模型。1.白藜芦醇对体外OGD/R损伤后N9小胶质细胞活力的浓度效应。实验分组为:(1)正常组(Nor),(2)对照组(Ctrl),(3)溶剂组(vehicle,Veh),(4)不同浓度的白藜芦醇组(1,5,20,40,80μmol/L),(5)空白组(Blank)。2.Shh信号是否介导白藜芦醇抑制OGD/R或MCAO/R损伤后小胶质细胞活化及炎症反应。实验分组为:(1)正常组(Nor)或假手术组(Sham),(2)对照组(Ctrl),(3)白藜芦醇组(Res),(4)白藜芦醇+Shh受体Smo抑制剂环王巴明组(R+C),(5)环王巴明组(Cyc)。3.Sirt1对Shh信号的影响(体外研究)。实验分组为:(1)正常组(Nor);(2)对照组(Ctrl);(3)白藜芦醇组(Res),(4)Sirt1抑制剂Sirtinol组。采用CCK-8法、TTC染色、Longa评分、Bederson评分和mNSS评分分别评估细胞活力、脑梗死体积和神经功能。流式细胞学、免疫荧光、ELISA法和Western blotting检测小胶质细胞的凋亡、活化、炎症反应和Shh信号通路相关蛋白的表达。结果:1.白藜芦醇对体外OGD/R损伤后N9小胶质细胞活力的浓度效应。CCK-8法检测结果显示OGD/R损伤后对照组,1、5、20、40和80μmol/L白藜芦醇组细胞活力均较正常组降低(P<0.05),但5、20和40μmol/L白藜芦醇组细胞活力较对照组显著增强(P<0.05),以20μmol/L组最强。2.Shh信号是否介导白藜芦醇抑制OGD/R或MCAO/R损伤后小胶质细胞活化及炎症反应。白藜芦醇组与对照组相比较,白藜芦醇增强OGD/R损伤后小胶质细胞的活力(P﹤0.05),抑制其细胞凋亡百分比(P﹤0.05),下调Iba1、Caspase3、Bax、TNF-α和IL-1β等蛋白的表达(P﹤0.05),上调抗炎因子IL-10和Shh信号通路相关蛋白Shh、Ptc-1、Smo、Gli-1的表达(P﹤0.05),促进Smo蛋白向初级纤毛移位和Gli-1核移位;同时,改善MCAO/R损伤后小鼠Longa、Berderson和mNSS等神经功能评分(P﹤0.05),减小脑梗死体积(P﹤0.05),抑制小胶质细胞Iba1、TNF-α和IL-1β的表达(P﹤0.05),促进抗炎因子IL-10的表达(P﹤0.05)。相反,Shh受体Smo拮抗剂环王巴明可消除白藜芦醇的上述作用(P﹤0.05)。3.Sirt1对Shh信号的影响。Western blotting检测显示Sirt1拮抗剂Sirtinol能抑制Shh信号通路相关蛋白Shh、Ptc-1、Smo、Gli-1的表达(P﹤0.05);同时,免疫荧光染色显示Sirtinol可抑制Gli-1核移位。结论:白藜芦醇可能通过Sirt1激活Shh信号调控OGD/R或MCAO/R损伤后小胶质细胞活化及炎症反应,从而改善缺血性脑损伤后神经功能。