论文部分内容阅读
目的：从宏观表征及行为学、微观理化指标、方剂反证三方面验证高血压肝火亢盛证证候时间窗(自发性高血压大鼠(SHR) 14-18周龄)的可靠性,确立高血压肝火亢盛证病证结合动物模型；在确定高血压肝火亢盛证病证结合动物模型的基础上进一步通过大鼠脑功能核磁共振技术静息态血氧水平依赖成像(BOLD-fMRI)寻找高血压肝火亢盛证大鼠中枢调控区域,通过脑功能核磁共振技术自选动脉标记方法(ASL-fMRI)检测相关区域脑血流量,反映脑血流动力学改变,并应用高效液相色谱法检测核心脑区单胺神经递质变化,研究高血压肝火亢盛证中枢调控作用及其微观生物学机制。方法：1参照前期研究工作中确定的高血压肝火亢盛证证候判别方法从SHR大鼠中筛选出表现为肝火亢盛证的大鼠,分为模型组、三草降压汤组、四逆散组、硝苯地平组；不表现肝火亢盛证的SHR大鼠为非模型组；正常血压大鼠(WKY)为正常组。从12周龄到20周龄每两周对各组大鼠进行血压值检测、宏观表征采集及旷场试验、旋转耐受试验、易激惹程度评分等行为学评价,进行证候属性判别；14-20周龄应用三草降压汤,四逆散和硝苯地平缓释片进行药物干预；并用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组大鼠给药4周(18周龄)和给药6周(20周龄)血清NE、ANGII、5-HT、ET1含量。2应用德国Bruker公司Bruker PhamaScan 7T对14周龄、l 8周龄、20周龄模型组、非模型组、给药组(三草降压汤)、正常组大鼠脑部依次进行T2加权像、静息态BOLD-fMRI及ASL-fMRI检测,并应用SPM8软件对静息态BOLD影像进行低频振荡幅度(ALFF)和局部一致性(ReHo)分析,通过大脑神经元的自发低频活动信息反映中枢神经系统基础状态下的自发神经活动区域,ReHo分析探索相关区域活动的同步性,从而寻找高血压及其肝火亢盛证中枢调控区域。应用Bruker PhamaScan 7T自带软件分析全脑及左右下丘脑、左右海马、左右皮层血流量。3高效液相法检测14周龄和18周龄模型组、非模型组、给药组(三草降压汤)和正常组下丘脑神经递质5-羟色胺(5-HT)、5羟基吲哚乙酸(5-HIAA)、去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、多巴胺(DA)、3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)含量。结果：1宏观表征动态采集、行为学评价及证候属性判别结果显示：模型组大鼠在14-18周龄表现为稳定的肝火亢盛证；三草降压汤组大鼠随给药时间增加宏观表征有较显著的改善,旷场试验总活动距离、穿越格数、易激惹程度评分和旋转耐受时间也有不同程度改善；非模型组大鼠随周龄增加逐渐出现肝火亢盛证症状。血压值检测结果显示模型组和非模型组大鼠随周龄增加血压值逐渐升高,但模型组大鼠血压值始终高于非模型组；三草降压汤组大鼠血压值上升趋势不明显且从16周龄(给药2周)开始血压值降低,18周龄(给药4周龄)和20周龄(给药6周)时血压值显著低于模型组大鼠(P<0.05)。2静息态BOLD分析提示高血压肝火亢盛证大鼠大脑活动区域广泛分布在大脑皮层及边缘系统,包括下丘脑、海马、脑桥被盖部、中脑导水管周围灰质等区域,提示下丘脑等边缘系统各个区域和大脑皮层多处区域激活共同促进高血压及其肝火亢盛证的发生和发展。肝火亢盛证与非肝火亢盛证作用脑区无本质性差别,只是作用时间和作用程度上存在差异,作用机制需进一步研究。3 ASL法检测脑血流量结果显示14-18周龄间模型组、非模型组、给药组(三草降压汤)与正常组相比全脑及相应区域血流量呈稍高灌注且混杂低灌注,正常组稍低灌注。各组大鼠全脑血流量均随周龄的增加呈现降低趋势。模型组与非模型组相比全脑血流量均较低,18周龄时模型组血量均低于非模型组,其中全脑、左侧海马、右侧皮层区域差异有统计学意义(P<0.05)。三草降压汤药物干预后血流量仍呈持续下降,三草降压汤可能不是通过改善脑血流状态发挥作用,各组大鼠左右皮层灌注稍低。4高效液相色谱法下丘脑神经递质检测结果显示模型组大鼠14周龄时DA水平,18周龄E水平,14、18周龄NE、DOPAC、5-HT、5-HIAA水平显著高于正常组(P<0.05)。14、18周龄模型组DA、DOPAC、5-HT、5-HIAA含量均略高于非模型组,差异无统计学意义(P>0.05)。三草降压汤干预4周(18周龄)时NE显著低于模型组,DA、DOPAC、 5-HT、5-HIAA与模型组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论：1经宏观表征及行为学,微观理化指标和方剂反证验证SHR大鼠14-18周龄表现为稳定的肝火亢盛证,即高血压肝火亢盛证病证结合动物模型成立。2静息态BOLD-fMRI初步确定高血压肝火亢盛证中枢调控区域。通过脑功能核磁影像技术研究发现下丘脑、海马、中脑导水管周围皮质和皮层多处区域激活共同作用促进高血压及其肝火亢盛证的发生和发展。肝火亢盛证肝失藏血,疏泄太过,多表现为情绪上急躁易怒、头痛眩晕,这些区域的激活可初步解释肝火亢盛证症状,可以作为高血压肝火亢盛证发生机制的研究方向。肝火亢盛证与非肝火亢盛证作用脑区无本质性差别,仅表现在作用时间和作用程度上的差异,作用机制需进一步研究。3 ASL-fMRI技术检测高血压肝火亢盛证大鼠脑区血流量,各组SHR大鼠脑血流量均随周龄的增加呈现降低趋势,脑循环障碍逐渐加重。4下丘脑相关神经递质促使高血压肝火亢盛证的发生。模型组NE维持在较高水平,三草降压汤干预后NE水平降低,提示下丘脑NE的升高可能与高血压肝火亢盛证的发生密切相关,高血压肝火亢盛证中枢神经生物学机制在整体上可能与调节下丘脑—垂体—肾上腺轴有关。