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猪圆环病毒2型(Porcineciro virus type2, PCV2)是隶属于圆环病毒属的一种单链、环状、无囊膜的DNA病毒,是与被称为猪圆环相关性疾病(PCVAD)的一种关系最为密切的致病病原体。目前,PCV2的感染已经蔓延世界养猪国,是被公认的全球性疫病,给世界养猪业造成了巨大的损失,对于PCV2相关疾病的调查研究成为热点。我国从2000年首次检出PCV2以来,猪场中PCV2的感染率一直居高不下,且分子流行病学调查结果显示,PCV2在不断发生变异,形成新的基因型。同时PCV2常与其它病原混合感染,难以进行临床诊断。因此,对PCV2的分子流行病学调查以及研制基于单克隆抗体的检测技术对PCV2的防控具有重要的意义。1.2012-2013年江苏部分地区猪圆环病毒2型的分子流行病学调查为了解近年江苏地区PCV2分子流行病学变化趋势,采集疑似PCV2感染猪的病料139份进行PCR检测和病毒分离鉴定,PCR检测阳性率32.4%(45/139),分离率为23.7%(33/139)。对分离到的33株PCV2分离株进行序列测定和分析,序列比对结果显示：33株PCV2分离株均为PCV2b亚型,其中25株为1C群,8株为1A/1B群。研究显示PCV1C群已在江苏PCV2的流行毒株中占据主要地位。2.猪圆环病毒2型Cap基因的原核表达PCR扩增PCV2去除核定位信号的Cap基冈,成功将其分别插入至原核表达载体pGEX-6p-1、pGEX-4T-1、pET-32a和pCold中,并转化到表达菌株BL21中,其中重组菌pGEX-6p-1-sCa、pGEX-4T-1-sCap、pET-32a-sCap经诱导后在BL21中表达。通过对温度、转速、IPTG浓度等诱导条件的优化,重组菌pGEX-6p-1-sCap能以可溶性形式得到大量表达。经谷胱甘肽树脂纯化后,以GST-sCap融合蛋白免疫小鼠制备血清,IFA试验结果显示抗血清与感染了PCV2的Dulac细胞能够产生特异性荧光反应,表明GST-sCap融合蛋白具有良好的抗原性。3.猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体的制备以纯化的GST-sCap融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,通过间接ELISA方法筛选出与Cap蛋白反应呈阳性,与GST蛋白反应呈阴性的孔进行亚克隆,获得4株能稳定分泌抗Cap蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为1D6、5D11、6B7和6G5。腹水的间接ELISA效价分别为1：64000、1：64000、1：128000及1：128000;亚类鉴定结果分别为IgG2b、IgG1、IgG2a、IgGl;间接免疫荧光结果显示,4株单抗均能与感染PCV2的Dulac细胞反应产生特异性绿色荧光,与感染PCV1、PRRSV、PRV的细胞反应则无荧光；Western blot试验结果表明所制备出的4株单抗均能与Cap蛋白反应,而与GST标签蛋白不具有特异性反应,中和试验结果表明,4株单抗中只有6B7有中和效价,其他均无中和特性。