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本论文的工作包括两部分，首先我利用小分子库在斑马鱼中筛选能够调节Hedgehog(Hh)通路的小分子。将Hh信号通路的下游转录因子Glil的特异性DNA结合位点重复8次后插入gata2基因的最小启动子前，以GFP为报告基因制备了转基因鱼系，并证明该鱼系的GFP表达能够忠实反映Hh通路的激活情况。在此工作的基础上，通过筛选一个基于Hh通路激活剂SAG(Smo agonist)骨架的小分子库，我确定了两个Hh通路的抑制小分子：SANT74和SANT75。观察结果表明SANT75处理后的胚胎其体节、血管、胰腺内分泌腺以及神经系统的发育都受到影响，定量PCR结果表明Hh通路下游的靶基因ptcl和gtlil的表达都被降低。利用荧光素酶报告基因系统及采用荧光共振能量转移技术(Fluorescence Resonance Energy Fransfer，FRET)的方法，我在NIH3T3细胞中精确地测定了SANT74和SANT75的半数抑制浓度(The halfmaximalinhibitory concentration，IC50)分别为70 nM和20nM，并证明两者通过改变细胞膜上Smo的构象状态来调节Hh通路下游的激活或者关闭，在293细胞中SANT75能够抑制cyclopamine(环巴胺)和Smo的结合。通过上述工作，我鉴定出了两个有效调节Smo的小分子，发现它们影响Smo的蛋白构象，通过筛选得到的构效关系信息将为先导化合物的进一步优化提供线索。其次本论文采用双荧光报告质粒的方法进行斑马鱼miRNA的表达谱分析。我改造基于Tol2转座子的载体Tol2-MCS，制作含有红色荧光蛋白和绿色荧光蛋白两个报告基因双荧光报告质粒(sensor)；在其中一个报告基因的3’-UTR区连接感兴趣的miRNA互补序列。利用互补序列与斑马鱼体内的miRNA结合后能够使该报告基因的荧光信号强度减弱的现象，在显微注射瞬时表达或转基因稳定整合的水平上，比较两个报告基因在表达谱上的差异辨别miRNA的表达区域，从而检测斑马鱼胚胎中成熟miRNA表达的位置和时间。Sensor为在斑马鱼中对miRNA进行活体、实时的时空定位提供了一个独特的方法，为以后在斑马鱼中对miRNA进行更深入的研究奠定了基础。