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牛乳过敏是一种常见的食物过敏反应,牛乳中β-乳球蛋白(β-Lg)被认为最主要的过敏原蛋白之一。本论文利用β-Lg靶向结合适配体,以此对β-Lg过敏原表位进行定位掩盖处理,利用不同蛋白酶对特定位点进行水解,从而达到降低β-Lg致敏性的效果。研究结论如下：1β-乳球蛋白过敏原表位适配体的计算机辅助分子设计与筛选试验以p-乳球蛋白为模板,针对不同过敏原表位,基于正义链和反义链互补的原则,利用计算机辅助分子设计筛选出与β-球蛋白过敏原表位很好结合的适配体。根据能量最低原则筛选出QWVW, RRSL, GWGLP, RDGY和WVDL这五组适配体。2中性蛋白酶与胰蛋白酶水解β-乳球蛋白的条件的优化试验选用中性蛋白酶、胰蛋白酶分别水解β-乳球蛋白,通过单因素与正交实验,筛选出两种酶水解p-乳球蛋白的最佳条件。实验结果表明,中性蛋白酶水解最佳底物质量浓度为1mg/mL,酶解温度50℃、pH7.2、酶与蛋白浓度比3%、酶解时间6h；胰蛋白酶水解最佳底物质量浓度为1mg/mL,酶解温度45℃、pH8.0、酶与蛋白浓度比2%、酶解时间4 h。3 β-乳球蛋白水解物的分离纯化及致敏位点的定位水解试验选用Sephadex G-15为分离介质,用以分离β-乳球蛋白、中性蛋白酶水解p-乳球蛋白产物、胰蛋白酶水解β-乳球蛋白产物。实验结果表明,最佳分离条件为磷酸盐缓冲液离子强度为0.03mol/L的pH8.0,恒定流速为0.7ml/min。通过游离氨基酸的测定发现,适配体QWVW对接p-乳球蛋白后用蛋白酶水解,游离氨基酸的含量均有所下降,说明β-乳球蛋白水解度下降。4 β-乳球蛋白的水解产物对小鼠致敏性的影响通过小鼠耳速发型主动皮肤过敏试验和口服致敏小鼠肠腔通透性测定试验表明,β-乳球蛋白致敏小鼠以后,与空白组相比伊文思蓝渗出率和小肠指数均显著的升高。适配体QWVW、WVDL对接β-乳球蛋白降低致敏性的效果较好。通过小白鼠血清中IgG的测定试验表明,QWVW和WVDL这两组适配体应该掩盖住了β-乳球蛋白致敏位点,降低了-乳球蛋白的致敏性。说明适配体QWVW对应的VTQT,以及适配体WVDL对应的TQLE是β-乳球蛋白上的致敏位点。