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目的:以小鼠S180肉瘤为研究对象,观察蝎毒多肽提取物(PESV)联合雷帕霉素(RAPA)对S180肉瘤生长的影响及自噬相关因子Beclin1和MAP1LC3A和肿瘤干细胞标记物CD133和CD90的蛋白表达变化,探讨蝎毒多肽提取物抑制S180肉瘤的作用机制,为临床抗肿瘤治疗提供理论依据。方法:1.建立小鼠S180肉瘤皮下荷瘤模型,随机分为荷瘤对照组、PESV高、低剂量组、雷帕霉素(RAPA组)和联合组(即PESV高+RAPA组),每组10只,连续干预21天。隔日用游标卡尺测量肿瘤体积和用天平测小鼠体重,绘制肿瘤体积增长曲线并计算抑瘤率,观察各实验用药组对S180肉瘤移植瘤生长的抑制作用。2.常规HE染色,光镜下观察S180肉瘤组织病理学改变。3.激光共聚焦显微技术检测S180肉瘤组织中Beclin1、MAP1LC3A、CD133和CD90蛋白表达。4.免疫组织化学法检测S180肉瘤组织中Beclin1、MAP1LC3A、CD133和CD90蛋白表达。5.Western blot法检测S180肉瘤组织中Beclin1、MAP1LC3A、CD133和CD90蛋白表达水平。结果:1.各个实验用药组对小鼠S180肉瘤移植瘤生长的影响药物干预后,pesv高、低剂量组、rapa组和联合组小鼠s180肉瘤移植瘤体积增长速度较荷瘤对照组均减慢,瘤重亦降低,抑瘤率分别为25.4%、15.3%、34.0%和42.5%,差异均有统计学意义(p<0.05,p<0.01);与rapa组比较,联合组的瘤重和肿瘤体积亦均存在显著差异(p<0.05);与pesv低剂量相比,pesv高剂量组肿瘤体积减小,肿瘤生长减慢(p<0.05)。2.各个实验组肿瘤组织的病理学变化he染色后光镜下观察,可见对照组坏死区较少且面积较小,少见核固缩等形态学变化。联合组、rapa组和pesv高、低剂量组可见多个大面积片状坏死区,大部分肿瘤细胞呈呈现核固缩、核碎裂等多种细胞死亡形态学改变。联合组肿瘤组织坏死区域最大。给药组亦可见肿瘤细胞胞质无定形,核碎断的表现,可能是肿瘤细胞自噬的结果。癌巢周围有单核细胞等炎细胞的浸润。3.pesv联合rapa对s180肉瘤组织beclin1、map1lc3a、cd133和cd90蛋白表达水平的影响应用激光共聚焦显微镜技术可见,beclin1、map1lc3a、cd133和cd90在胞浆与胞膜上均有表达,cd133与cd90主要表达于细胞膜上,为绿色荧光着色。与荷瘤对照组相比,其它给药组的beclin1和map1lc3a荧光强度均增高,而cd133与cd90荧光强度降低。联合组beclin1和map1lc3a荧光强度最高,cd133与cd90荧光强度最低。免疫组织化学法染色结果显示,与荷瘤对照组比较,给药组beclin1、map1lc3a表达均增多(p<0.05,p<0.01);cd133和cd90表达降低(p<0.05,p<0.01)。联合组beclin1、map1lc3a表达显著增多(p<0.01),cd133和cd90表达显著降低(p<0.01)。与pesv低剂量组相比,pesv高剂量组beclin1和map1lc3a表达增多,cd133和cd90表达明显降低(p<0.05)。westernblot半定量法检测结果显示,联合组、rapa组,pesv高低剂量组与荷瘤对照组比较,beclin1、map1lc3a的表达条带均增高,cd133和cd90的表达条带均减弱。联合治疗组beclin1、map1lc3a的表达条带表达显著增高(p<0.01),cd133和cd90的表达条带显著减弱(p<0.01)。检测结果与免疫组织化学法和免疫荧光共聚焦法检测结果基本一致。结论:1.PESV联合RAPA可明显抑制小鼠S180移植瘤的生长;2.PESV与RAPA可分别上调Beclin1、MAP1LC3A蛋白表达,可能与促进S180肉瘤细胞自噬性死亡有关。3.PESV与RAPA可分别下调CD133和CD90蛋白表达,可能与抑制S180肉瘤中肿瘤干细胞生长有关。4.PESV联合RAPA可能通过协同增强细胞自噬和抑制肿瘤干细胞发挥抗肿瘤效应。