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目的应用RNA慢病毒BCL6-shRNA、ICOS-shRNA转染TNBS诱导的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠模型,检测UC小鼠中滤泡辅助性T细胞(T follicular helper cell,Tfh)/滤泡调节性T细胞(T follicular regulatory cell,Tfr)的表达及其细胞因子BCL6、ICOS对其表达的调控,研究其在UC发病机制中的作用。方法将100只雄性C57小鼠随机分为正常对照组、TNBS模型组、模型小鼠+BCL6-shRNA组、模型小鼠+ICOS-shRNA组、模型小鼠+Ubi-EGFP(空载体)组,每组均为20只。UC小鼠模型的建立采用皮肤致敏联合TNBS灌肠法。正常组同时予同体积0.9%氯化钠溶液灌肠。模型小鼠+BCL6-shRNA组、模型小鼠+ICOS-shRNA组、模型小鼠+Ubi-EGFP(空载体)组的小鼠分别于第1次灌肠后第1、7、14、21天于腹腔及尾静脉注射BCL6-shRNA、ICOS-sh RNA、Ubi-EGFP(空载体)慢病毒载体各100ul,于最后一次慢病毒载体注射后1周处死全部小鼠。建立模型后每日观察并记录所有小鼠的体重、毛发、大便性状、活动等变化情况,评估小鼠疾病活动度、小鼠结肠黏膜大体形态损伤状况和组织学损伤程度。运用流式细胞术检测各组小鼠脾脏中Tfh、Tfr细胞百分率及Tfh/Tfr细胞比例,RT-PCR检测各组小鼠CD4mRNA、CXCR5mRNA、BCL-6mRNA、FOXP3mRNA、ICOSmRNA、PD1mRNA水平,采用三色荧光标记法研究各组小鼠结肠黏膜淋巴生发中心中CD4~+CXCR5~+FOXP3~+Tfr和CD4~+CXCR5~+PD1~+Tfh细胞百分率Tfh/Tfr细胞比例。结果模型组及空载体转染组DAI评分、CMDI、组织学损伤评分显著高于正常对照组(p<0.01),病毒转染组介于正常对照组和模型组之间。与正常对照组相比,TNBS模型组、模型小鼠+BCL6-shRNA组、模型小鼠+ICOS-shRNA组、模型小鼠+Ubi-EGFP(空载体)组脾脏及结肠黏膜中Tfh细胞含量显著增高(p<0.01)、Tfr细胞含量明显降低(p<0.01)、Tfh/Tfr细胞比例显著增高(p<0.01)。与TNBS模型组、模型小鼠+Ubi-EGFP(空载体)组相比,模型小鼠+BCL6-shRNA组、模型小鼠+ICOS-shRNA组经慢病毒转染后,脾脏及结肠黏膜中Tfh细胞含量有所下降(p<0.01),Tfr细胞含量有所增多(p<0.01),Tfh/Tfr细胞比例有所下降(p<0.01),但仍高于正常对照组(p<0.01)。与正常对照组相比,TNBS模型组、模型小鼠+BCL6-shRNA组、模型小鼠+ICOS-shRNA组、模型小鼠+Ubi-EGFP(空载体)组结肠中BCL6mRNA、ICOSmRNA表达显著增高(p<0.01);而模型小鼠+BCL6-shRNA组、模型小鼠+ICOS-shRNA组经慢病毒转染后,结肠中BCL6mRNA、ICOSmRNA表达较TNBS模型组和模型小鼠+Ubi-EGFP(空载体)组有所降低(p<0.01),但仍高于正常对照组(p<0.01)。结论在TNBS诱导的结肠炎小鼠中,存在Tfh和Tfr两种细胞的异常调控及分化,提示Tfh和Tfr可能在UC的发病机制起到重要作用。通过下调UC小鼠中BCL6、ICOS影响Tfh和Tfr细胞含量及Tfh/Tfr细胞比例,可改善UC小鼠的肠道炎性反应。Tfh/Tfr及其相关细胞因子BCL6、ICOS在UC免疫反应中起到重要的促进作用,是UC致病的关键。