【摘 要】
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目的:1.观察胆固醇对血管内皮细胞生长的影响;2.在观察到胆固醇可致血管内皮细胞凋亡的前提下,探讨其作用机理.方法:以胆固醇处理内皮细胞48小时,用MTT法检测它对内皮细胞活
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目的:1.观察胆固醇对血管内皮细胞生长的影响;2.在观察到胆固醇可致血管内皮细胞凋亡的前提下,探讨其作用机理.方法:以胆固醇处理内皮细胞48小时,用MTT法检测它对内皮细胞活力的影响,用Hochest 33342染色、TUNEL和流式细胞术等方法检测内皮细胞凋亡情况.在观察到胆固醇可致内皮细胞凋亡的前提下,用抑制消减杂交法筛选胆固醇处理的内皮细胞与阴性对照内皮细胞间的差异表达基因,克隆、测序并进行同源性比较;以Northern Blot及RT-PCR法鉴定部分差异基因的表达情况;用RT-PCR、流式细胞术、酶活性测定等方法检测caspase-3的表达及激活;;以流式细胞术检测caspase-9、Bcl-2、p53、p21等基因的表达.结论:1.胆固醇可诱导内皮细胞凋亡;2.已知的差异基因中血小板反应蛋白-1、蛋白水解酶β亚基等基因与内皮细胞凋亡相关;3.caspase-3、caspase-9、Bcl-2、p53、p21等基因在胆固醇诱导的内皮细胞凋亡中起重要作用.
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