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PD-1与其配体PD-Ls属于B7-CD28超家族，最早在T细胞杂交瘤细胞凋亡调节研究中发现。PD-1与PD-Ls结合后介导的抑制信号对T细胞的活化和耐受有重要的调节作用。阻断PD-1与其配体（PD-Ls）的结合可以使病毒持续性感染时功能障碍或衰竭的CD8+T细胞功能恢复。PD-1:PD-Ls通路能够在中枢免疫和外周免疫反应中传递免疫耐受和免疫抑制信号，控制着细胞因子和抗体的产生、CTL的增殖活化及对自身抗原的耐受。在动物免疫抑制性疾病或病毒持续性感染方面，T细胞免疫抑制性受体PD-1的研究才刚刚起步，特别是在家禽类该方面的研究还少见报道。本课题以IBDV感染后T淋巴细胞表面免疫抑制性受体PD-1及其配体PD-Ls为对象，研究其表达变化情况及其与机体免疫状态的关系。根据GenBank中鸡PD-1、PD-L1、PD-L2、IL-2、IL-6、IFN-γ以及参考基因β-actin的序列信息，分别设计特异引物扩增目的基因片段，得到各自阳性克隆质粒，以阳性质粒作为标准品建立标准曲线，并进行敏感性、特异性和重复性试验，建立上述基因的SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR检测方法。并利用所建立的方法对4周龄健康雏鸡人工感染IBDV后第3、5、7、10天PBMC中PD-1及其配体PD-L1、PD-L2的表达变化情况进行检测，同时检测了与机体免疫调控相关的重要细胞因子IL-2、IL-6和IFN-γ的表达变化情况。分析在IBDV感染后，病毒在机体内的复制、增殖与PD-1、PD-L1和PD-L2表达变化之间的关系。结果表明，建立的SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR检测方法在1×101～1×109copies/μL模板范围内具有良好的线性关系（R2>0.99），可检测至少101copies/μL的阳性标准样品，且具有较好的特异性和重复性。IBDV感染后，病毒在雏鸡体内复制逐渐增加，至第5天病毒载量达到峰值，随后逐渐降低。免疫抑制性受体实时荧光定量RT-PCR检测结果表明，PD-1及配体PD-L1、PD-L2在病毒感染后表达量均有所升高，其中PD-1在病毒感染后第7-10天升高显著（P<0.05），PD-L1、PD-L2均在病毒感染后第3-10天显著升高（PD-L1，P <0.01; PD-L2，P <0.05）。病毒感染后部分免疫调节相关细胞因子检测结果表明，在IBDV急性感染期（3-7d）IFN-γmRNA表达水平表达水平持续增高，当PD-1表达增高后（7天），IFN-γ表达水平开始急剧下降且变化显著（P<0.05）。IL-2和IL-6mRNA表达水平都在IBDV感染后第3天急剧升高，随着感染的持续，IL-2和IL-6mRNA表达水平持续降低（5-10天）。本研究成功建立了鸡PD-1及配体PD-L1、PD-L2和细胞因子IL-2、IL-6、IFN-γ实时荧光定量RT-PCR检测方法。应用该方法初步分析了IBDV感染后鸡PD-1、PD-L1、PD-L2及细胞因子IL-2、IL-6、IFN-γ的表达变化，发现IBDV感染后，PD-1及配体PD-L1、PD-L2的表达均升高，且PD-L1、PD-L2的表达先于PD-1升高，并与病毒载量呈正相关。在IBDV感染后，IL-2、IL-6和IFN-γ基因表达显著升高，随着鸡PD-1、PD-L1和PD-L2表达的升高，鸡IL-2、IL-6和IFN-γ基因表达均呈现下降趋势。以上结果初步证明了鸡IBDV感染可引起鸡T细胞免疫抑制性受体PD-1及其配体PD-L1、PD-L2表达升高，与此同时机体IL-2、IL-6和IFN-γ基因表达下降，机体出现免疫抑制状态。