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第一部分脂氧素受体激动剂BML-111抑制博来霉素诱导的小鼠肺纤维化及其相关机制目的：研究脂氧素受体激动剂BML-111对博来霉素（belymicn, BLM）诱导肺纤维化小鼠生存率、肺组织总胶原蛋白、羟脯氨酸和TGFβ1含量、以及肺组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和纤维连接蛋白1（Fn1）表达的影响，以探讨BML-111对肺纤维化的干预作用及相关机制。方法：通过气管内一次性给予BLM2.5mg或2mg/kg复制小鼠肺纤维化模型。用于生存率研究的小鼠气管内给予BLM的剂量为2.5mg/kg，动物随机分为三组：Sham组（生理盐水（saline, SAL））、BLM组（BLM+SAL）、BML-111组（BLM+BML-111），连续21天每天记录动物生存情况用于生存率研究。评估BML-111干预效果使用的BLM为2mg/kg，动物随机分为四组：Sham组、BLM组（BLM+SAL）、 BML-111组（BLM+BML-111）、 BOC-2组（BLM+BML-111+BOC-2）。Sham组气管内给予SAL，给予SAL后2h腹腔注射SAL1ml，以后隔天注射。其余三组均气管内给予BLM，BLM组2h后腹腔注射SAL，以后隔天注射。 BML-111组和BOC-2组给予BLM后2h腹腔注射BML-111（1mg/kg），BOC-2组在每次给予BML-111前30min给予B0C-2（50μ g/kg）。而其余三组也于相同时间给予含0.125%DMSO的SAL1ml作为溶剂对照。21天后取肺组织标本， HE染色及Massion染色用于观察小鼠肺损伤及纤维化程度；化学比色法检测肺组织羟脯氨酸含量；染料结合法检测肺组织总胶原蛋白浓度；ELISA法检测肺组织标本中TGFβ1水平；Western blotting检测α-SMA, Fn1蛋白表达。结果：BML-111可以显著改善BLM诱导肺纤维化小鼠的生存情况（P<0.01）；HE及massion染色显示，Sham组肺组织结构无明显病理改变，BLM组、BML-111组以及BOC-2组都有不同程度的损伤和纤维化，与BML-111组相比，BLM组和BOC-2组损伤和纤维化更加明显；与Sham组相比，其余三组肺组织总胶原蛋白水平、羟脯氨酸含量、TGFβ1明显升高(P<0.05或P<0.01)， BLM组和BOC-2组又高于BML-111组(P<0.05或P<0.01)。结论：BML-111可以减轻BLM诱导肺纤维化小鼠肺组织胶原蛋白沉积，降低α-SMA的表达，抑制TGFβ1的产生，减轻小鼠肺纤维化程度，而BOC-2可以拮抗BML-111的这种作用。第二部分脂氧素受体激动剂BML-111抑制TGFβ1诱导的胚胎肺成纤维细胞激活目的：研究脂氧素受体激动剂BML-111对TGFβ1诱导的小鼠胚胎肺成纤维细胞α-SMA和Fn1的表达、总胶原蛋白的合成，以及细胞增殖能力的影响，以探讨BML-111是否可以抑制TGFβ1诱导的成纤维细胞激活。方法：以5ng/ml的TGFβ1刺激体外培养的NIH3T3细胞，首先用不同浓度的BML-111(1nM，10nM，100nM，200nM，500nM)进行干预，选出BML-111作用浓度（200nM）。根据处理药物的不同将细胞分为五组：（1）对照组：用含0.028%甲醇的无血清培养基处理；（2）TGFβ1组：用含0.028%甲醇的无血清培养基处理后加终浓度为5ng/ml的TGFβ1；(3) BML-111组：用终浓度为200nM的BML-111的无血清培养基处理；(4) BML-111+TGFβ1组：用终浓度为200nM的BML-111的无血清培养基处理30min后加终浓度为5ng/ml的TGFβ1处理；（5）BOC-2+BML-111+TGFβ1组：在用BML-111和TGFβ1处理前加10μM BOC-2处理30min。TGFβ1处理24h后进行相应检测。逆转录PCR检测NIH3T3细胞脂氧素受体表达；采用MTT法检测细胞增殖情况；Western blotting和免疫荧光技术检测成纤维细胞激活标记物α-SMA蛋白的表达；Western blotting检测Fn1的表达；染料结合法检测细胞培养基中总胶原蛋白的含量。结果： NIH3T3内检测到mRNA水平的脂氧素受体（ALX1/FPR-rs1和ALX2/FPR2）；BML-111可以抑制TGFβ1诱导的NIH3T3细胞的增殖效应(P<0.01)；200nM的BML-111预处理可抑制NIH3T3细胞Fn1的表达(P<0.05或P<0.01)；200nM的BML-111预处理可以抑制NIH3T3细胞总胶原蛋白的合成(P<0.05或P<0.01)；免疫荧光和Western blotting结果均显示，200nM的BML-111预处理可以抑制TGFβ1诱导的α-SMA的表达(P<0.05或P<0.01)。脂氧素受体拮抗剂BOC-2可以阻断BML-111的这种效应。结论：BML-111可以抑制TGFβ1诱导的NIH3T3细胞α-SMA的表达；抑制TGFβ1诱导的Fn1的产生，抑制细胞合成总胶原蛋白的能力。此外，还可以抑制TGFβ1诱导的细胞增殖。第三部分脂氧素受体激动剂BML-111抑制TGFβ1诱导的NIH3T3细胞内Smad2/3、Erk、Akt信号通路的激活目的：研究BML-111对TGFβ1介导的Smad依赖的和非Smad依赖的信号通路激活的影响。方法：以5ng/ml的TGFβ1刺激体外培养的NIH3T3细胞作为成纤维激活模型，根据干预药物的不同将细胞分为4组：⑴对照组：用含0.028%甲醇的无血清培养基处理；⑵TGFβ1组：用含0.028%甲醇的无血清培养基处理30min后加终浓度为5ng/ml的TGFβ1处理；⑶BML-111组：用含200nM BML-111的无血清培养基处理；⑷BML-111+TGFβ1组：用含200nM BML-111的无血清培养基处理30min后加终浓度为5ng/ml的TGFβ1处理。TGFβ1处理24h后，采用Western blotting检测Smad2/3，磷酸化Smad2，磷酸化Smad3，总Erk，磷酸化Erk，总Akt，磷酸化Akt蛋白的表达。结果：5ng/ml TGFβ1刺激体外培养的NIH3T3细胞,可使细胞内磷酸化Smad2、磷酸化Smad3、磷酸化Erk、磷酸化Akt均升高，而BML-111可以部分抑制TGFβ1的这种效应。结论：BML-111可以抑制TGFβ1诱导的NIH3T3细胞Smad2/3、Akt、Erk信号通路的激活。