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核受体mLRH-1(Liver Receptor Homologl，NR5A2)是本实验室发现的核受体hBlF(hLRH-1／CPF，NR5A2)在小鼠中的同源物，属于核受体FTZ-F1亚家族的成员。LRH-1不仅在胆汁酸合成代谢途径、肝脏特异性基因表达的调控中发挥着关键作用，而且在胚胎早期发育过程中也有重要的功能。但对lrh-1基因在发育过程中的表达调控机制仍知之甚少。我们在小鼠胚胎干细胞(embryonicstem cell，ES cell)中发现了mLRH-1的一种异构体形式，并对其转录调控机制及进行了初步研究。 第一部分：mlrh-1基因的异构体mRNA(mlrh-1v2)的发现及鉴定 利用RT-PCR的方法，我们发现mlrh-1基因在ES细胞中表达的mRNA与已知的(mlrh-1v1，简称v1)不同，因而推测在ES细胞中可能有另外的表达形式存在。根据一条与mlrh-1基因相关的表达序列标签(expressed sequence tag，EST)设计引物，证明确实有一新的mRNA(mlrh-1v2，简称v2)存在，并通过5’-RACE(rapid amplification of cDNA ends)实验克隆得到了该mRNA的5’末端。发现v2含有一个新的第一外显子，由此造成该mRNA编码的蛋白产物(mLRH-V2)缺失了氨基末端的61个氨基酸残基。 电泳迁移率改变实验(electrophoresis mobility shift assay，EMSA)及报告基因分析实验证明mLRH-V2仍结合同样的靶序列，并同样是个转录激活因子。 对mlrh-1基因两种mRNA的表达时相及组织分布进行检测发现，v2在整个胚胎发育过程和多种组织中都有表达，而v1只在胚胎发育过程的中后期及肝脏、胰腺等组织中表达。根据同源性分析，我们推测并验证了在大鼠的发育过程中有编码lrh-1基因异构体的mRNA表达。 上述结果证实了mlrh-1的异构体的存在，而且胚胎发育早期和多数组织中mlrh-1基因的功能很可能是由该异构体实现的，并且这种异构体现象在哺乳动物中具有一定的保守性。 第二部分：调控mlrh-1v2的新启动子P2的克隆及分析 由于v2从一个新的外显子起始转录，所以应该是由一个新的启动子(P2)