青藏高原野生大麦HsCBL8基因在水稻中的表达及其耐盐性分析

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水稻是我国最重要的粮食作物之一,然而土壤盐碱化严重影响水稻产量。运用现代育种技术培育耐盐水稻新品种是应对土壤盐碱化问题的重要手段,而野生种质资源开发对于现代育种具有重大的意义。青藏高原被证明是栽培大麦起源中心之一,具有丰富的野生大麦种质资源,能为农作物逆境胁迫抗性育种提供宝贵的基因资源。CBL家族蛋白是植物所特有的Ca2+感受蛋白,能与CIPK蛋白形成复合体,特异性解码Ca2+信号,调控植物体响应逆境胁迫。本研究将野生大麦中耐盐相关基因HsCBL8导入到拟南芥和水稻中,以研究其在植物耐盐生理中的作用。取得的主要成果如下:1.比较了青藏高原一年生野生大麦XZ166(HsCBL8的来源)与栽培大麦CM72在盐胁迫下的植株表型差异,Na+、K+含量及其比率,发现XZ166具有高度耐盐性;荧光定量PCR证明XZ166中CBL8基因对盐胁迫响应更加高效。2.构建ProHscBL8-GUS表达载体,导入拟南芥中,在外源ABA、盐胁迫、干旱胁迫和冷胁迫处理条件下,转基因拟南芥GUS蛋白活性不同程度升高,表明HsCBL8受多种逆境诱导上调表达。3.构建35S-HsCBL8超表达载体,通过农杆菌导入水稻品种ZH11,经过PCR、Southern杂交及反转录PCR验证,获得了目的基因单拷贝插入并且能稳定表达的纯合转基因后代。4.比较T3代转基因水稻与野生型水稻在盐胁迫(100mM NaCl)下植株表型和各项耐盐生理数据,结果显示转基因水稻耐盐性显著高于野生型,证明外源HsCBL8基因提高了转基因水稻的耐盐性。
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