不同种属动物对大豆凝集素敏感性的比较研究

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 13次 | 上传用户:shengwei05
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本试验以六种动物(鸡、鹅、狗、兔、猪、山羊,各4个重复)为研究对象,通过细胞凝集和吸附测定两种方法,研究了纯化大豆凝集素(SBA)对不同种动物的影响。凝集反应试验采用吸光法测定了SBA与动物未经修饰的红细胞、胰蛋白酶修饰的红细胞和脾脏淋巴细胞的凝集活性;吸附试验采用ELLSA法测定了SBA与小肠粘膜和完整小肠组织的结合能力。 试验中所用的纯化SBA用交联瓜尔多糖凝胶法进行分离提纯而获得,在细胞凝集试验中,以2倍稀释法设定SBA的浓度梯度,在可发生凝集作用的有效时间后,测定上清液620nm处的吸光值;在吸附测定试验中,所用ELLSA法是直接以SBA为抗体,用辣根过氧化物酶进行标记,标记抗体与小肠样品反应后,通过测定酶活性(OD495nm)来间接反应肠黏膜与SBA的结合能力,试验设九个SBA浓度梯度。 SBA与未经修饰红细胞的凝集反应表明:兔对SBA极为敏感,猪次之,山羊只在特定浓度区间发生凝聚反应,鸡、鹅和狗未发生凝集反应。对兔来说,SBA稀释度从2倍到64倍这个区间,其OD值几乎为零,发生强凝集反应;稀释到1024倍,SBA浓度为1.5×10-3mg/ml时,红细胞悬浮液的OD值与空白对照管基本相同,无凝集现象发生,此时可能达到了临界浓度。对猪来说,SBA稀释度在16倍前,发生强凝集反应;稀释到128倍,SBA浓度为1.25×10-2时,无凝集反应发生。羊的情况较特殊,只在SBA被稀释8倍到64倍之间时发生弱凝集反应,其它浓度时无凝集现象。 SBA与胰酶修饰红细胞的凝集反应表明:红细胞经修饰后,某些动物对SBA更为敏感。修饰后,兔红细胞在SBA稀释到4096倍才无凝集反应,临界浓度可能为3.93×10-4mg/ml,敏感程度提高了4倍;猪的红细胞在SBA稀释到1024倍时,无凝集反应,临界浓度为1.5×10-3mg/ml,敏感程度提高了6-8倍;鸡的红细胞经胰酶修饰前,无凝集作用发生,而修饰后,在SBA稀释到2倍至4倍时发生弱凝集反应;山羊的红细胞经胰酶修饰以后,反而无凝集作用发生,但不能断言其无SBA结合位点,可能是因为山羊的红细胞不适合被胰酶修;鹅、狗红细胞依然无凝集反应。 SBA与脾淋巴细胞的凝集反应表明:六种动物的淋巴细胞均不同程度地与SBA发生了凝集反应。兔最敏感,最高稀释度为64倍,临界浓度为0.025mg/ml;鹅、狗、鸡最高稀释度为16倍,临界浓度为0.1mg/ml;猪的最高稀释度为8倍,临界浓度为0.2mg/ml;羊的最高稀释度为4倍,临界浓度为0.4mg/ml。
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