休克期大面积切痂对严重烧伤大鼠细胞免疫功能影响的研究

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目的:1观察休克期大面积切痂对严重烧伤大鼠细胞免疫功能的影响,2探索烧伤后机体免疫功能紊乱的可能机制及改善烧伤后机体免疫功能紊乱的有效方法。方法:健康wistar 大鼠70 只,体重200±20 克,雌雄各半,随机分成休克期切痂组(A 组,30 只)、常规治疗组(B 组,30 只)和正常对照组(C组,10 只)。实验动物适应性喂养一周,8%硫化钠溶液背部脱毛。实验前禁食禁饮12 小时,腹腔注射5%盐酸氯氨酮(2ml/kg)麻醉。麻醉满意后,置俯卧位,按公式S=K·W2/3(K=0.091;S=体表面积cm2;W=体重g)计算出30%TBSA(total body surface area)面积。按此面积调节烫伤仪喷头面积。在106℃,3MPa,大鼠背部致伤8 秒钟造成30%TBSA Ⅲ度烫伤,病理切片证实,正常对照组为37℃假伤。烫伤大鼠均依parkland 公式,于伤后即开始液体复苏;麻醉清醒后自由进食。休克期切痂组于伤后第6 小时、常规治疗组于伤后第4 天,麻醉,一次切除全部Ⅲ度焦痂,辐照氟银猪皮覆盖创面。于伤后第1、5、9 天活杀A、B 组大鼠各10 只,无菌条件下取脾脏及下腔静脉血4ml,草酸钾抗凝后送流式细胞仪室检测各免疫指标:T 细胞亚群、NK 细胞活性、CD25+ T 细胞的量。在无菌条件下将脾脏制成单细胞悬液用含10%小牛血清的RPMI 1640 培养液稀释成1~10×106浓度的单细胞悬液。加入含Con A 的6 孔培养板置于37℃,5%CO2孵箱中孵育48 小时。将其取出并移至试管离心(1000 转/分钟)5 分钟,得沉淀加PBS 液稀释至106/ml细胞并加入CD3和CD25三色直标单抗充分混匀后上机检测分析。利用SPSS12.0 统计软件对实验数据进行统计学处理。
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