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背景和目的EB病毒阳性弥漫大B细胞淋巴瘤（EBV-positive diffuse large B-cell lymphoma,EBV+DLBCL）是一种 EB 病毒（Epstein-Barr virus,EBV）阳性的克隆性B细胞增殖性肿瘤,起源于EBV介导的转化的成熟B细胞,患者通常缺乏先天性免疫缺陷病史。EBV+DLBCL,NOS好发于50岁以上的老年人,也可见于年轻患者,男性多见,男:女约为1.2-3.6:1,占所有淋巴瘤的2%-15%,占无免疫缺陷弥漫大B细胞淋巴瘤（Diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL）的5%-8%。2008年《淋巴造血组织肿瘤WHO分类》将老年人EBV阳性弥漫大B细胞淋巴瘤单独列出,但其后较多研究证实其也可见于年轻人,因此,2016年《淋巴造血组织肿瘤WHO分类》（修订版）将其更名为EBV+DLBCL,NOS,并定义为独立的肿瘤实体。组织学上,EBV+DLBCL主要表现为多形性和单形性两种形态学特点。多形性EBV+DLBCL表现为在反应性炎细胞背景中散在分布转化性大细胞,大细胞可以为中心母细胞样、免疫母细胞样或R-S样细胞。单形性EBV+DLBCL表现为弥漫分布、形态学相对一致的转化性大细胞,背景中不存在或仅存在少量的反应性细胞。由于形态上与多种淋巴瘤有一定的重叠性,使得EBV+DLBCL的诊断与鉴别诊断困难,其中,多形性亚型EBV+DLBCL与经典型霍奇金淋巴瘤（Classical Hodgkin lymphoma,CHL）形态学上均可出现R-S样细胞,免疫组化上也存在部分交叉:比如两者均可表达CD20、PAX5、CD30、甚至CD15等,因此,在临床病理学工作中,两者的鉴别尤其困难。为EBV+DLBCL寻找新的更好的诊断与鉴别诊断的免疫学标记物,仍然具有重要意义。信号传导及转录激活蛋白（Signal transducer and activator of transcription,STAT）是一类能与DNA结合的蛋白质。当STAT被磷酸化后,聚合成二聚体形式,进入细胞核内与靶基因启动子结合,促进其转录。研究表明,STAT家族与多种肿瘤的发生及发展有着重要的关系,如甲状腺癌、前列腺癌、肝癌、白血病、恶性黑色素瘤等。STAT6属于STAT蛋白家族成员之一,最近研究发现,在霍奇金淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤及原发性纵隔大B细胞淋巴瘤等多种淋巴造血系统肿瘤中,STAT6信号通路均呈现过度激活。STAT6YE361兔单克隆抗体是目前较为常用的商品化试剂,在组织中呈现细胞核和/或细胞浆阳性。研究表明,STAT6YE361在多数CHL中具有细胞核表达,表达率约为81%,而在结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤中虽然表达率也较高（74%）,但均为胞浆阳性,STAT6YE361在两种淋巴瘤中的表达差异具有统计学意义（尤其是核表达模式）,其在两者的鉴别诊断中具有重要意义。后续研究表明,在原发中枢神经系统淋巴瘤、DLBCL和结内边缘区淋巴瘤中,STAT6 YE361均呈胞浆表达,但在以上淋巴瘤的诊断与鉴别诊断中的意义尚不明确。目前,国内外尚无STAT6YE361在EBV+DLBCL中的表达的相关报道。本研究采用免疫组织化学法检测STAT6YE361在EBV+DLBCL和CHL中的表达率及表达模式,对比两者的表达差异,探索其在两者鉴别诊断中的意义。同时研究STAT6YE361的表达率与EBV+DLBCL患者临床病理学参数之间的关系及其预后意义。材料及方法1.收集郑州大学第一附属医院2017年03月至2021年05月诊断的EBV+DLBCL,NOS 27例及CHL 31例,查阅电子病历和/或电话随访,收集患者的临床诊疗信息及预后。2.所选用标本均经10%中性福尔马林固定、常规脱水、石蜡包埋、3um厚切片、HE染色,应用EBER原位杂交和基因检测技术重新确诊。3.免疫组织化学:以扁桃体标本为阴性对照,应用SP三步法检测EBV+DLBCL和CHL中STAT6YE361的表达,显微镜下观察着色细胞比例及细胞定位。阳性判读标准:棕黄色信号定位于细胞浆和/或细胞核为阳性表达;核表达定义为:单独核阳性,或细胞浆和细胞核同时阳性;按照阳性肿瘤细胞/所有肿瘤细胞的百分比定义表达率:阴性:0、低表达:≤30%、中表达:＞30%且≤60%、高表达:＞60%且≤100%。4.统计学方法:使用SPSS 23.0统计软件分析处理数据。检验水准α=0.05,P＜0.05代表有统计学差异。采用Kaplan-Meier法单因素分析影响患者预后的临床病理学参数,应用Log-rank检验比较生存率差异。定性资料采用Fisher确切概率法分析。结果1.临床病理学资料:27例EBV+DLBCL患者中,男14例,女13例,男女比例为1.08:1;中位年龄64岁,年龄范围11-84岁;多数患者表现为贫血（74.1%）、LDH值升高（59.3%）、伴淋巴结以外部位累及（51.9%）及具有较高的临床分期（Ⅲ-Ⅳ期患者占70.4%）;随访时间1-53月,中位随访时间27月,其中,23例接受化疗,15例存活,9例死亡,3例失访,死亡率33.3%。2.组织学:27例EBV+DLBCL中,多形性18例,占66.7%,其中12例可见地图样坏死;单形性9例,占33.3%。免疫组化染色示27例EBV+DLBCL中,多数病例表达B细胞标记物,96.3%（26/27）的病例CD20阳性,8例（100%）PAX5 阳性、18 例（100%）CD79α阳性;74.1%（20/27）的病例表达CD30,Hans分型 92.6%（25/27）为non-GCB型,70.4%（19/27）的病例Ki-67 增值指数＞60%;所有病例EBER原位杂交均可见≥80%的瘤细胞阳性。3.STAT6YE361在组织中的表达:26例EBV+DLBCL中（1例肺穿刺活检标本因组织过少,免疫组化靶组织丢失而未计数）,STAT6YE361总表达率为88.5%（23/26）,其中核表达率34.6%（9/26）,均为细胞核与细胞浆同时阳性,单纯胞浆阳性病例占50.9%（14/26）;31例CHL中均表达STAT6YE361（阳性率100%）,其中核表达率为74.2%（23/31）,均为细胞核与细胞浆同时阳性,单纯胞浆阳性病例占25.8%（8/31）。统计学分析显示,STAT6YE361在EBV+DLBCL中的核表达率明显低于CHL,差异有统计学意义（P＜0.05）;两者的总表达率及单纯胞浆表达率差异无统计学意义（P＞0.05）。4.EBV+DLBCL中STAT6YE361的表达与其临床病理学参数之间的关系:EBV+DLBCL中,STAT6YE361的总表达率与患者的临床病理参数及预后均无显著相关性（P＞0.05）;STAT6YE361的核表达率在女性、年龄＞60岁、LDH值升高、无B症状及IPI评分≥3分的患者中较高（P＜0.05）,但与患者的Ann Arbor分期、血红蛋白值、结外累及与否、形态学分型、Ki-67增值指数、Hans分型及CD30表达均无显著相关性（P＞0.05）。STAT6YE361单纯胞浆表达率在年龄≤60岁、LDH值正常、无B症状及IPI评分＜3分的患者中较高（P＜0.05）,而与性别、Ann Arbor分期、血红蛋白值、结外累及与否、形态学分型、Ki-67增值指数、Hans分型及CD30表达均无明显相关性（P＞0.05）。5.Kaplan-Meier生存分析:生存分析显示,EBV+DLBCL中,STAT6YE361的核表达率、患者的年龄、有无B症状及化疗与否均与患者的预后有明显相关性:具有STAT6YE361核表达且表达率为中-高表达的患者预后更差,伴有B症状、年龄＞60岁及未接受化疗的患者平均生存时间缩短（P＜0.05）。结论STAT6YE361在EBV+DLBCL中有较高的表达率,但核表达率远低于CHL（P＜0.05）,这在两者的鉴别诊断中具有一定意义;在EBV+DLBCL中,与无核表达的患者相比,STAT6YE361核表达的患者具有较差的预后。