目的:卵巢组织冷冻作为女性生育力保存的一种方法,具有广阔的应用及发展前景。目前卵巢组织冷冻仍是一项试验性技术,标准化的冷冻方案尚未确定。本研究初步比较三种不同的冷冻方法对人卵巢皮质组织玻璃化冷冻效果的影响,旨在探讨人卵巢皮质组织玻璃化冷冻的可行方案。材料与方法:收集2014.3~2014.9因卵巢良性囊肿于天津市中心妇产科医院实施手术的40例患者的卵巢皮质块作为实验材料。术中切除的卵巢组织放入装有磷酸盐缓冲液的离心管中,置于冰上半小时内送至实验室。将卵巢皮质切割成大小为5×1×1mm3的组织块,每位患者的卵巢组织块随机平均分为四组:一组作为新鲜对照组,剩余三组作为实验组行玻璃化冷冻。本实验中联合使用低浓度的乙二醇和二甲基亚砜作为玻璃化冷冻保护剂,实验组分别行微滴法玻璃化冷冻、冻存管法玻璃化冷冻、尼龙筛网法玻璃化冷冻,放入液氮保存一周后解冻复苏。观察并计数新鲜组和实验组卵巢组织内各级卵泡数、计算始基卵泡的正常形态率,通过TUNEL法检测卵巢组织细胞凋亡情况,通过免疫组织化学法检测细胞增殖情况,比较并分析四组数据。结果:1.卵巢组织形态学检测结果:微滴法组、尼龙筛网法组与新鲜组相比,总卵泡数及始基卵泡所占比例无统计学差异(P>0.05),冻存管法组的总卵泡数及始基卵泡所占比例明显少于新鲜组,差异有统计学意义(P﹤0.05)。新鲜组始基卵泡正常形态率明显高于三个实验组,差异有统计学意义(c2=6.956,P=0.008;c2=27.038,P=0.000;c2=10.963,P=0.001),微滴法组、尼龙筛网法组始基卵泡正常形态率高于冻存管法组,差异均有统计学意义(c2=8.444,P=0.004;c2=5.309,P=0.021),微滴法组与尼龙筛网法组始基卵泡正常形态率之间的差异没有统计学意义(c2=0.507,P=0.476)。光镜下观察可见实验组部分卵巢组织出现间质水肿、间质细胞连接疏松、颗粒细胞层与卵泡膜之间空隙增大。2.TUNEL检测结果:四组卵巢组织中各级卵泡中卵母细胞及颗粒细胞中均未见凋亡细胞,而卵巢间质细胞核内可见凋亡细胞。3.免疫组化Ki67表达结果:微滴法组、尼龙筛网法组Ki67阳性细胞数目与新鲜组比较无统计学差异(P>0.05),冻存管法组Ki67阳性细胞数目明显低于新鲜组,差异有统计学意义(P﹤0.05),微滴法组和尼龙筛网法组相比无统计学差异(P>0.05)。结论:1.本课题为天津市卫生局资助项目,首次全面系统地采用不同冷冻试剂配伍不同冷冻载体对人卵巢组织玻璃化冷冻的效果进行观察评价。本部分实验内容固定冷冻试剂不变,分析并讨论三种冷冻载体应用于人卵巢组织玻璃化冷冻的效果。2.从卵巢组织形态学、细胞凋亡及细胞增殖三个方面判断:微滴法及尼龙筛网法的玻璃化冷冻效果优于冻存管法。3.新型冷冻载体尼龙筛网为人卵巢组织玻璃化冷冻提供了新的选择。4.本实验结果表明卵巢组织玻璃化冷冻是保存女性生育力的可行方法。本实验为临床正式应用卵巢组织冷冻提供了技术方面的准备,同时为建立卵巢组织冷冻库奠定基础。