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昆虫密度依赖的抗病性观点已得到学术界的广泛认可,然而密度依赖的抗病免疫功能变化的分子机制尚不清楚。生物胺是昆虫神经系统与免疫系统联系的纽带。已有研究表明,章鱼胺对粘虫幼虫密度依赖的免疫功能具有重要调控作用。本文对高、低密度饲养的粘虫幼虫头部、血细胞、脂肪体的转录组学分析,筛选出粘虫幼虫密度依赖的免疫及其调控相关的基因,初步阐明粘虫幼虫密度依赖的抗病免疫的分子机制。主要研究结果如下: 室内条件下(温度23±1℃,RH70%±5%,光周期16L∶8D)饲养的高、低密度(10、1头/瓶)粘虫幼虫血淋巴对不同病原菌的抑制效果测定结果表明,高、低密度饲养的粘虫幼虫对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、弧菌和鲶爱德华氏菌的抑制效果存在显著差异。10头/瓶幼虫血淋巴对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、弧菌和鲶爱德华氏菌的抑菌活力明显高于1头/瓶和对照组幼虫。在供试36h范围内,随着时间的延长,抑菌作用愈加明显。因此,粘虫高密度幼虫血淋巴抗菌能力显著高于低密度幼虫。 为探明粘虫幼虫密度依赖的抗病能力变化的分子机制,对10、1头/瓶饲养的粘虫幼虫头部、血细胞、脂肪体进行了转录组测序分析。通过功能注释高、低密度粘虫幼虫三个组织的差异基因,共鉴定出免疫相关的基因模式识别蛋白19个,抗菌肽基因25个,酚氧化酶原级联反应相关的基因15个,其他细胞免疫相关的有9个,与调控免疫相关的生物胺合成酶及生物胺受体基因有6个。随机选取4个抗菌肽基因进行RT-PCR验证,结果表明,10头/瓶饲养的粘虫幼虫体内4个抗菌肽基因相对表达量均显著高于1头/瓶饲养的幼虫,这与我们的转录组测序结果均为一致。通过分析筛选出对免疫调控其关键作用的差异基因之一酪胺β羟化酶的功能进一步深入研究。 通过注射法RNA干扰高密度饲养(10头/瓶)的粘虫幼虫酪胺-β羟化酶基因后,研究粘虫幼虫的血细胞总数、酚氧化酶活力及溶菌酶活力等免疫指标及幼虫抵抗苏云金芽孢杆菌杆菌侵染能力的变化。结果表明,注射TβHdsRNA后高密度幼虫的dsTβH基因表达量显著下降。同时,RNA干扰幼虫的血细胞总数、溶菌酶活性、酚氧化酶活力分别下降55.77%、88.48%、82%。RNA干扰后幼虫抵抗苏云金芽孢杆菌的侵染能力明显降低,幼虫的校正存活率下降55.77%。结果表明,酪胺β羟化酶在粘虫幼虫密度依赖的抗病免疫过程中起重要作用。