纳米ZnO对羊角月牙藻的毒性效应及其机理研究

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纳米氧化锌(ZnO NP)作为目前世界上产量和使用量最大的金属氧化物纳米材料之一,其在生产、运输或使用时直接或间接处置产品释放到不同环境介质中,而水体便是其归趋之一。水体中的生物体,特别是与它们直接相互作用那些生物,例如藻类,水草和鱼类等有更大的机会暴露于纳米材料并受到冲击。而目前关于 ZnO NP对藻类细胞毒性效应研究较少,且其对细胞致毒机理研究仍未得出统一的定论。  本研究以初级生产者藻类中的羊角月牙藻作为受试生物,以ZnO NP为研究对象,研究了不同浓度 ZnO NP对羊角月牙藻生长、叶绿素含量、可溶性蛋白含量、超氧化物岐化酶(SOD)及过氧化物酶(POD)活性、丙二醛(MDA)含量及细胞内外ZnO NP变化。其次,为了解不同光照条件下 ZnO NP对细胞生长及表面结构影响,本研究设置在黑暗及正常光照周期(光照/黑暗=14 h/10 h)两种条件下,研究不同浓度ZnO NP及Zn2+对羊角月牙藻生长、叶绿素a荧光、细胞膜通透性、藻分泌蛋白及细胞表面结构影响。  结果表明,ZnO NP对羊角月牙藻的生长抑制与处理浓度呈现正相关。在45 mg·L-1 ZnO NP暴露24 h后,其生长抑制率已达到95%。当ZnO NP作用藻细胞72 h后,羊角月牙藻细胞的叶绿素含量与处理浓度之间存在剂量-效应关系。低浓度(0.5 mg·L-1)ZnO NP处理后藻细胞可溶性蛋白质含量、SOD和POD酶活性明显下降,MDA含量升高,其产生的毒性效应高于高浓度组(5 mg·L-1,45 mg·L-1)。细胞培养液溶出Zn2+量及藻细胞外吸附的ZnO NP与ZnO NP浓度成正比,但是藻细胞内ZnO NP量与ZnO NP浓度没有相关性。  另外,在黑暗条件下,ZnO NP对藻细胞生长无影响,甚至在短期内能够促进其生长;而转换到正常光照周期下,不同浓度ZnO NP作用藻细胞24 h后,其细胞数与对照相比降低了51%~54%。不同浓度Zn2+在两种条件下均能抑制细胞生长。在黑暗条件下,ZnO NP对细胞叶绿素 a自发荧光无影响;而暴露于正常光照周期下,不同浓度ZnO NP对藻细胞叶绿素a荧光影响不同于黑暗条件,与对照组相比,在1,5及10 mg·L-1 ZnO NP作用72 h后,叶绿素a荧光强度分别降低36%,50%及65%,由此可见在光照影响下,ZnO NP会降低细胞叶绿素 a荧光强度,进而影响光合作用。三维荧光光谱(3D-EEM)结果表明,暴露于正常光照周期下,10 mg·L-1 ZnO NP作用藻细胞72 h后,与对照组相比,分泌蛋白的荧光强度降低59%,使得藻分泌蛋白的组成及含量发生了改变。傅立叶红外光谱(FT-IR)和扫描电镜(SEM)证实了ZnO NP能够与细胞表面的官能团结合,进而使得大量的纳米颗粒吸附于细胞表面,并引起表面结构的改变。光照条件下,ZnO NP对细胞的损伤增大,这可能归功于其光催化性能。
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