目的:研究阿奇霉素合用生脉注射液导致潜在的心律失常作用及其分子机理。方法:1.豚鼠在体心电图记录:20%乌拉坦(5 mL/kg)对豚鼠进行腹腔注射麻醉,仰卧位固定在板上,分离出一侧颈静脉,用静脉输液针进行插管,给药。四肢皮下扎入电极引导出心电信号并记录,用四道生理记录仪采集导出的心电图数据并存档计算机。于静脉推注药物5 min后记录心电图,分析心率(HR)、P-R间期、QRS间期和QTc间期。2.豚鼠离体心电图记录:20%乌拉坦(5 mL/kg)对豚鼠腹腔注射麻醉,固定后迅速开胸取出心脏,置于0-4℃的无钙灌流液中。应用改进的Langendorff装置灌流系统,经主动脉插管进行离体心脏灌流,心脏复跳后在心外膜下置3根银丝电极:正极置于心尖处,负极置于右心房,接地电极置于主动脉根部,引导出离体心脏心电图。待豚鼠心脏跳动稳定后,信号经四道生理记录仪输入计算机记录,分析心率(HR)、P-R间期、QRS间期和QTc间期。3.豚鼠左心室肌细胞动作电位记录:用改良后的酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞。健康豚鼠,雄性,250々300 g。腹腔注射20%乌拉坦(5 mL/kg),在100%氧饱和的0℃无钙台氏液中清洗修剪,并将其固定在改良的Langendorff心脏灌流装置上,在37℃的恒温,充氧(95%O2 + 5%CO2)条件下,用无钙灌流液持续逆向灌流,使心脏先复跳后停跳,再用含消化酶(Collage-naseⅡ 2 mg/mL,胰蛋白酶0.1mg/mL)的无钙灌流液反复灌流40min,至心脏膨大、松弛,最后再用适量KB液灌流冲洗。取下心脏,将消化后的左心室肌组织块置于盛有KB液的玻璃皿中充分剪碎,用直径200 μm的尼龙网过滤,将细胞悬液导入离心管中,静置,KB液洗三次。最后置于室温下备用。在室温下用膜片钳全细胞电流钳技术记录豚鼠左心室单个心肌细胞的动作电位。实验开始前先用细胞外液冲洗膜片钳装置的灌流槽,然后再将细胞悬液加入膜片钳装置的灌流槽中,待细胞稳定后,用细胞外液灌流。用于实验的细胞应该选择横纹清晰,杆状,边缘不卷曲,不收缩,表面无颗粒,没有收缩的细胞进行实验。用于本实验的电极是由外径为1.5 mm、内径为1.1 mm的玻璃毛细管经微电极拉制仪两步拉制而成,尖端直径为1 μm,注意使用拉制仪要先预热,玻璃毛细管最好两边长度一样,然后将细胞内液充灌入玻璃电极,把电极装到膜片钳装置上,粗调电极到细胞上方,再用三维微调节器慢慢调节电极尖端位置直至碰到细胞表面,然后进行封接。在电压钳模式下测电阻,入水电阻为2～5M Q,封接电阻要达到1GΩ以上,补充快电容,然后再给予一个负压使细胞膜破裂从而形成全细胞记录模式。在电流钳的模式下记录细胞动作电位。动作电位信号经膜片钳放大器放大,由数模转换器转换与计算机对接,在电脑显示器上示出电位变化,由软件Clampfit 10.4(Axon Instruments USA)完成电信号的发放、采集以及数据的分析,并把数据存到计算机里,分析APD50及APD90。4.豚鼠心肌细胞L型钙通道电流记录:在室温(22～25℃)下采用膜片钳全细胞电压钳技术记录豚鼠心肌细胞L型钙通道电流。先分离豚鼠左心室肌细胞,再将细胞悬浮液加到膜片钳装置上的灌流槽中,等细胞稳定贴壁后,用细胞外液灌流。用于实验的细胞仍然要选取横纹清晰,形似杆状,边缘不卷曲,不收缩,表面光滑,且没有收缩的细胞。刺激程序:钳制电压为-80 mV,阶跃到-40 mV并维持200 ms(使Na+电流失活),然后施加到0 mV的300 ms试验电压。5.全细胞电压钳记录钠电流:在室温(22～25℃)下采用膜片钳全细胞电压钳技术记录豚鼠心肌细胞钠离子电流。分离得到豚鼠原代左心室肌细胞,将得到的细胞悬液加到膜片钳装置的灌流槽中,待细胞沉降贴壁后,用细胞外液灌流。刺激方案:起初钳制电位为-80 mV,然后增加到-40 mV维持50 ms,最后再将钳制电位回到-80 mV。结果:1.阿奇霉素合用生脉注射液对豚鼠在体心电图的作用心电图结果表明1倍临床剂量组(38.2 mg/kg)的阿奇霉素以及1倍临床剂量组(4.6 mL/kg)的生脉注射液对豚鼠心电图(ECG)没有明显影响。而两药合用(均1倍临床剂量)时,能够显著降低心率(P<0.05),延长P-R(P<0.05)及QRS(P<0.05)间期,而QTc间期则没有显著变化。2.阿奇霉素合用生脉注射液对豚鼠离体心电图的作用随着阿奇霉素注射液的浓度增加,其降低豚鼠心率,延长P-R,QRS及QTc间期的作用也越来越显著。5倍、10倍临床浓度组的生脉注射液能有效降低豚鼠心率,延长其P-R间期。但对QTc及QRS间期没有明显作用。1倍临床浓度的阿奇霉素合用1倍临床浓度的生脉注射液显著使心率下降,延长P-R及QRS间期。3.阿奇霉素合用生脉注射液对豚鼠左心室肌细胞动作电位的作用1倍临床浓度组(41.5 mg/L)的阿奇霉素没有显著缩短或延长动作电位复极于50%及90%水平的时程(APD50及AD90))和动作电位幅值。而1倍临床浓度(41.5 mg/L)的阿奇霉素合用1倍临床浓度(5 mL/L)生脉注射液显著抑制动作电位幅值(P<0.05);并显著缩短APD5o(P<0.05)及 APD90(P<0.05)。4.阿奇霉素合用生脉注射液对豚鼠心肌细胞L型钙通道电流的作用与对照组相比较,阿奇霉素1倍临床浓度(41.5 mg/L)对L-type Ca2+电流的抑制作用不明显,然而1倍临床浓度(41.5 mg/L)阿奇霉素合用1倍临床浓度(5 mL/L)生脉注射液显著抑制 L-type Ca2+电流(P<0.05)。5.阿奇霉素合用生脉注射液对豚鼠心肌细胞Na+电流的作用与对照组相比,1倍临床浓度(41.5 mg/L)阿奇霉素对Na+电流无显著作用。而1倍临床浓度(41.5 mg/L)的阿奇霉素合用1倍临床浓度(5 mL/L)的生脉注射液显著抑制豚鼠心肌细胞 Na+电流(P<0.05)。结论:1.豚鼠的在体心电图和离体心脏心电图实验表明阿奇霉素合用生脉注射液会诱发心律失常。2.心肌细胞动作电位实验表明,阿奇霉素(AZM)合用生脉注射液(SM)明显缩短APD5o和APD90,降低动作电位幅值,使心室内传导缓慢,进一步验证了 AZM合用SM致心律失常作用。3.膜片钳离子通道实验的结果表明,AZM合用SM能够不同程度抑制L型钙通道、钠通道。揭示AZM合用SM能诱导正常豚鼠发生房室传导阻滞和心室内传导阻滞,这可能与其明显抑制钠、钙通道有关。