精子介导基因转移是以精子为载体，在受精时将外源目的基因导入卵母细胞，是目前转基因动物研究中简单而高效的方法学之一。乳铁蛋白(LTF)也称为乳转铁蛋白,是一种铁结合蛋白，广泛分布于多种组织、细胞内，具有非特异性免疫、参与铁代谢和细胞生长调节等功能。研究了在精子介导基因转移过程中精子与外源结合的影响因素，并对利用精子载体法制备LTF转基因山羊进行了初步研究。 精子与外源DNA共孵育后，精子结合外源DNA的效率就成为精子介导转基因法成功的关键。以DIG标记的EGFP作为示踪基因来检测精子结合外源DNA的影响因素，用考马斯亮蓝染色技术评价精子的顶体反应。结果显示：山羊精子能够自发的结合外源DNA，而且，最初的结合部位在精子外膜的顶体后区，在检查的27只公羊样本中，结合率在3.2％-48.40％，不同供体的精子结合外源DNA的能力有显著差异(p<0.01)。同一山羊的精子分别在17℃、27℃、37℃条件下，与外源DNA共孵育。结果表明：精子与外源DNA的结合率随共孵育时间的延长而增加。在27℃和37℃下，孵育60分钟后的结合率不再增加，同样的结果出现在17℃处理了90分钟的试验组里。为获得高转染率，分别对EGF、Insulin,肝素和ITS四种因子对精子结合外源DNA的影响也进行了评价。结果表明：用添加10 ng/ml EGF的BO液能显著提高转染率(试验组30.5％，对照组19.4％)，但精子获能的比率变化不大。相似的结果出现在Insulin和肝素处理的组里。用ITS的最终浓度(0.5％-5％)评价其促进DNA与精子的结合能力。在0.5％ITS组，试验组(0.5％，16.2％；1％，12.0％；2％，9.5％；5％，9.4％)和对照组(21.9％)外源DNA的转染率显著不同。精子获能率在5％ITS试验组和对照组差异显著(64.7％vs.86.2％)，但其他试验组差异不显著(0.5％，87.9％；1％，85.7％；2％，82.7％)。此外，EGF(10 ng/ml)、Insulin(5 ug/ml)和肝素(10 ug/ml)对DNA转染的比率也进行了评价，试验组和对照组有明显差异(27.9％VS.19.3％)(p<0.05)。然而，BO液添加LipefectaminTM-2000抑制三个因子对山羊精子转染外源DNA的促进作用(22.1％VS.27.9％)(p<0.05)。对70只母羊进行同期发情处理，其中有26只发情，发情率为37.1％。精子与LTF基因共孵育后，对62只母羊进行人工授精，共产生后代26只，经过PCR检测LTF阳性后代有2只，阳性率为7.7％，试验结果证明了精子介导法制备转基因山羊的可行性。